玉米蛋白酶解产物氨基酸组成的测定

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1、深圳职业技术学院学报2004年第4期JournalofShenzhenPolytechnicNo.4,2004玉米蛋白酶解产物氨基酸组成的测定1221黄国清，李世敏，刘冬，郭勇（1.华南理工大学食品与生物工程学院，广东广州510640；2.深圳职业技术学院应用生物工程系，广东深圳518055）摘要：利用反相高效液相色谱法对玉米黄粉蛋白酶解产物的氨基酸组成进行了测定，发现酶解产物中含有大量的Phe（Phenylalanine，苯丙氨酸），Leu（Leucine，亮氨酸）等必需氨基酸和Pro（Proline，脯氨酸），他们可以添加到食品中来补充必需的氨基酸和降低高血压患者的血压，对

2、综合开发利用这一丰富的农副产品具有重要的意义。关键词：玉米黄粉蛋白；氨基酸；高效液相色谱中图分类号：Q556;O657.72文献标识码：A文章编号：1672-0318（2004）04-0025-03玉米黄粉是玉米淀粉加工中的副产物，它是实验过程中所用水均为电阻率18.2GΩ的去离子从玉米中提取淀粉时得到的黄浆水，经过滤后得水；其余试剂均为国产分析纯；玉米蛋白粉购自山到的不溶于水的蛋白质，俗称黄粉子。玉米蛋白东鲁州食品有限责任公司。粉含蛋白质50%以上，有的达到70%，主要由玉1.2色谱条件米醇溶蛋白、谷蛋白、球蛋白和白蛋白等组成。色谱柱：HypersilC18柱(250mm×4

3、.0mmi.d.)；由于玉米蛋白粉组成复杂，口感粗糙，水溶性差，柱温40℃，进样量20μL；流动相A：20mmol，pH影响了其在食品工业中的应用。目前国内主要将7.2。乙酸－乙酸铵缓冲液＋0.018%三乙铵+0.3%[1]玉米黄粉用作动物饲料或者直接排放掉。我国四氢呋喃；流动相B：20mmol,pH7.2乙酸－乙酸每年随废液排走的玉米蛋白质高达8万多吨，既铵缓冲液∶甲醇∶乙腈＝1∶2∶2。流动相使用前经浪费了宝贵的粮食资源，又造成对环境的污染，0.45μm微孔滤膜过滤；洗脱程序见表1。DAD检因此，提高对玉米黄粉蛋白质的综合利用有着重测器程序：0-20min波长338nm，B

4、w10，参比波要的意义。本文利用高效液相的方法测定了玉米长390nm，Bw20；20-25min波长262nm，Bw16，蛋白酶解产物中的氨基酸组成，以期为玉米黄粉参比波长324nm，Bw8。蛋白的综合利用提供一条新的途径。表1梯度洗脱程序1试验部分时间(min)A（%）B（%）流速(mL/min)10.001000.00.4501.1仪器与试剂217.004060.00.450Agilent1100高效液相色谱仪：包括四元泵、318.100100.00.450真空脱气机、DAD检测器、柱温箱和手动进样器418.500100.00.800（配20ul定量环）；色谱纯甲醇、乙腈购

5、自天津523.900100.00.800协和昊鹏色谱科技有限公司；氨基酸标准品和624.000100.00.450OPA购自Agilent公司；FMOC和正缬氨酸内标725.001000.00.450购自Sigma公司；Alcalase2.4L购自Novo公司；收稿日期：2004-04-14项目来源：广东省社会发展攻关项目（2003C30104）作者简介：黄国清（1978-），男，湖北荆州人，硕士，主要研究方向为酶工程。26深圳职业技术学院学报第3卷1.3样品制备及处理中，依次加入5μL0.1mol/L盐酸、10μL1nmol/酶解产物的制备：玉米蛋白粉（蛋白质含量μL正缬氨酸

6、内标和72μL，0.4mol/L，pH9.4硼酸51%）用Alcalase2.4L酶解，酶解条件为：温度缓冲液，混匀后加入3μLFMOC50℃、酶量1.5%、底物浓度10%,pH8,5h，反应（fluorenylmethoxycarbonyl，芴代甲氧基酰氯）混过程中用氨水保持pH值恒定；反应结束后100匀反应30s，再加入5μLOPA（o-phthalaldehyde，℃煮沸10min灭酶，4500r/min离心15min，取邻苯二甲醛）反应1.5min，进样。上清液经10KDal的超滤膜过滤，透过液冷冻干2结果与讨论燥后即为待测样品，经凯氏定氮测得其蛋白质含量为87%。2.

7、1氨基酸的标准曲线与相关系数准确称取0.5478g样品，用6mol/L盐酸定容17种氨基酸混合标准溶液色谱图见图1。以峰至100mL，从中取出2.5mL放入两端封口的玻面积为纵坐标，氨基酸浓度为横坐标，得到各氨基璃管内于110℃马弗炉中消化24h，然后将消化液酸的回归方程，见表2。于70℃水浴上赶酸蒸干，然后用0.1mol/L盐酸定2.2样品中各种氨基酸含量容至10mL待测。玉米蛋白水解物的完全水解物的色谱图见图1.4衍生2。经过计算，玉米蛋白酶解物中各氨基酸的含量见准确吸取5μL待测液于干