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《玉米副产物中玉米赤霉烯酮的ELISA测定_张东升》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、检测技术《饲料工业》·2008年第29卷第1期玉米副产物中玉米赤霉烯酮的ELISA测定张东升王虎蔡建荣蔡正森摘要通过试验研究了酶联免疫吸附法在玉米及其副产物中玉米赤霉烯酮检测的应用。在优化了样品前处理后,其方法灵敏度为1.0ng/ml,线性范围为0~20ng/ml,回收率为70.3%~90.9%,并用该法测定了24份玉米副产物样品,检出率达100%,阳性率为37.5%,其结果表明该方法快速、灵敏、准确,有较好的实用性。关键词玉米副产物;玉米赤霉烯酮;ELISA;测定中图分类号S816.7玉米赤霉烯酮(Zearalenone,又名F-2、FES或RAL,ZENELISA
2、检测试剂盒(无锡市艾赛生物技术有限公以下简称ZEN)是唯一由禾谷镰刀菌产生的非甾类雌司);甲醇(AR级);pH值7.5的PBS缓冲溶液:8.7g激素型毒素。ZEN为白色晶体,溶于氯仿、二氯甲烷、乙NaCl,0.25gNaH2PO4·2H2O,3.0gNa2HPO4·12H2O,超腈、醇类和苯;微溶于石油醚和正己烷;几乎不溶于水,纯水定容至1000ml。ZEN标准品(Sigma,美国);标准[1,2]但溶于碱性水溶液。ZEN对动物繁殖的影响是各国品及样品稀释液(甲醇:PBS=1:9)。普遍关注的问题,主要引起动物雌激素亢进症,导致动1.2样品来源物不孕或流产,对猪、牛和
3、羊影响较大,给畜牧业带来新希望集团各分公司提供,共24份玉米副产物:玉[3,4]很大的经济损失。玉米、小麦和配合饲料污染ZEN米酒精糟(DDGS)3份,玉米蛋白粉11份、玉米蛋白饲的报告较多,此外,其它麦类、高粱、大米中也有一定料3份、玉米胚芽粕2份、玉米麸5份。另外玉米2份。程度的分布。玉米副产物是饲料生产中不可缺少的重1.3方法要原料之一,它是很多非优质玉米深加工过程中的副1.3.1原理[5]产物,其质量好坏直接影响饲料的利用率,而其中样品中的玉米赤霉烯酮经提取、纯化后与定量特ZEN是影响其质量的重要卫生指标之一。异性抗体反应,多余的游离抗体则与酶标板内的包被[6
4、,7]目前分析ZEN的方法包括:薄层色谱法、气相抗原结合,加入酶标记物和底物后显色,与标准比较[8][9,10]色谱法(GC)、高压液相色谱法(HPLC)和酶联免来测定含量。[11,12]疫法(ELISA)。对于大量样品的常规性定量检测,1.3.2样品处理酶联免疫分析具有简便、成本低、快速的优点。因玉米a:称取过筛(20目筛)样品5.00g置于带塞的三副产物随生产工艺的不同,其中的成分也有区别,在角瓶中,加入0.5gNaCl,加甲醇水(1:1)50ml振摇用ELISA准确测定其含量时带来很大的难度。本文旨10min,8000r/min离心20min,取上清液一定体积,
5、在通过优化该类样品的前处理,通过碱性水溶液提用样品稀释液适当稀释后作样品待测液。取,中和并转相至有机相中,然后进行ELISA检测。该b:称取10.00g试样置于带塞三角瓶中,加4ml水法具有较高的灵敏度、良好的重现性,为解决该类样和50ml的三氯甲烷,盖紧瓶塞,提取30min,加5.0g品中ZEN的快速、准确检测提供了有效途径。无水硫酸钠,混匀,过滤,取滤液25ml置于分液漏斗1材料与方法中,沿管壁慢慢加入氢氧化钠溶液(40g/l)20ml,并轻轻1.1仪器与试剂转动2min,静置分层,弃去三氯甲烷层。向氢氧化钠溶酶标仪(MK3,labsystem,热电);隔水式恒温
6、培养液层中加入3ml磷酸溶液(1+10),再用磷酸溶液(1+19)箱;小型粉碎机,微量移液器(20~200μl,labsystem);来调节pH值(请用pH计来调节)至9.5左右,然后加微型摇床(KS130,IKA,德国);高速离心机;pH计;入30ml三氯甲烷振摇提取5min,静置分层,放出三氯甲烷层至蒸发皿中,65℃水浴挥干,50ml的甲醇张东升,江苏省微生物研究所,助理研究员,214063,江苏水(1:1)溶解残渣。摇匀,稀释后作样品的待测液。省无锡市钱荣路7号。1.3.3ZEN标准溶液王虎,新希望集团中心化验室。蔡建荣、蔡正森,单位及通讯地址同第一作者。试剂盒
7、中有0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μg/l系列标收稿日期:2007-09-28准溶液。38张东升等:玉米副产物中玉米赤霉烯酮的ELISA测定检测技术1.3.4测定过程2测定结果与讨论试剂盒平衡至室温。用一抗稀释液1.5ml将一抗2.1线性范围及灵敏度浓缩液配制成工作溶液;用酶标二抗稀释液5.0ml将由图1标准曲线可以看出,ZEN标准品在0~20.0酶标二抗浓缩液配制成工作溶液。配制好洗涤液。插μg/l时有良好的线性关系,r=-0.9918线性回归方程入一定数量的酶标板于反应支架上。标记标准品孔和y=-0.3682x+0.7276(见表
