食品中玉米赤霉烯酮的测定

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1、GB/Txxxx—xxxx食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮的测定（征求意见稿）xxxx—xxxx实施xxxx—xxxx发布中华人民共和国卫生部发布中华人民共和国卫生部发布1.1.1.1　2010-06-01实施2010-××-××发布GB/Txxxx—xxxx前言本标准代替GB/T5009.209-2008《谷物中玉米赤霉烯酮的测定》和GB/T23504-2009《食品中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》。本标准与GB/T5009.209-2008和GB/T23504-2009相比，主要变化如下：——修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮

2、的测定（理化方法）》；——按照GB//T20001.4-2001对标准的结构进行了修改;——新标准内容是由原GB/T5009.209-2008和GB/T23504-2009两个方法组成，将GB/T5009.209-2008方法作为第一法，而GB/T23504-2009的方法作为第二法。8GB/Txxxx—xxxx食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮的测定1　范围本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮的测定方法。本标准第一法适用于谷物（玉米、小麦等）中玉米赤霉烯酮的测定，第二法适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中玉米赤霉烯酮含量的测定。2　原理试样中的玉米赤霉烯酮用乙腈-水提取后，提取液经

3、免疫亲和柱净化、浓缩后，用配有荧光检测器的液相色谱仪进行测定，外标法定量。第一法免疫亲和层析净化液相色谱法3　试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.3氯化钠（NaCl）。3.2试剂配制乙腈-水（9+1）：90mL乙腈与10mL水混合而成。3.3标准品玉米赤霉烯酮（C18H22O5）标准品：纯度≥98%。3.4标准溶液配制3.4.1玉米赤霉烯酮标准储备液（0.1mg/mL）：准确称取适量的玉米赤霉烯酮标准品，用乙腈溶解并定容至浓度为0.1mg/mL，

4、-20℃冰箱中避光保存，可使用3个月。使用前用流动相稀释成适当浓度的标准工作液。3.4.2玉米赤霉烯酮标准标准曲线工作液：将标准储备液用乙腈系列稀释后，配成浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.10μg/mL、0.40μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL和4.0μg/mL的标准曲线工作溶液，可使用7d。3.5材料3.5.1玉米赤霉烯酮免疫亲和柱。8GB/Txxxx—xxxx3.5.2玻璃纤维滤纸1　仪器和设备4.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器。4.2粉碎机。4.3高速均质器。4.4氮吹仪。4.5空气压力泵。4.6玻璃注射器：20mL。4.7天平：感

5、量0.0001g。2　分析步骤5.1试样制备5.1.1样品提取称取40g粉碎试样（精确到0.01g）置于250mL具塞锥形瓶中，加入4g氯化钠和100mL乙腈一水（9+1），以均质器高速搅拌提取2min，通过折叠快速定性滤纸过滤，移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释混匀，经玻璃纤维滤纸过滤1次～2次，至滤液澄清后进行免疫亲和柱净化操作。5.1.2净化将免疫亲和柱连接于20mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL（相当于0.8g样品）5.1.1的提取滤液，注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以1滴/s～2滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至有部分空气通过柱体。以

6、5mL水淋洗柱子1次，弃去全部流出液，并使部分空气通过柱体。准确加入1.5mL甲醇（3.1.1）洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱液于玻璃试管中，于55℃以下氮气吹干后，用1.0mL流动相[5.2.1b）]溶解残渣，供液相色谱测定。5.2仪器参考条件5.2.1液相色谱条件a）色谱柱：C18柱，150mm×4.6mm（内径），粒度4µm，或相当者；b）流动相：乙腈-水-甲醇（46+46+8）；c）流速：1.0mL/min；d）检测波长：激发波长274nm，发射波长440nm；e）进样量：100µL；f）柱温：室温。5.2.2色谱分析分别取样液和标准溶液各100µL注入高效液相色谱仪进行测定，

7、以保留时间定性，峰面积定量。在上述色谱条件下，玉米赤霉烯酮的保留时间约为3.4min。玉米赤霉烯酮标准品的液相色谱图参见图1。5.3空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。6分析结果的表述按外标法计算试样中玉米赤霉烯酮的含量，计算结果需将空白值扣除。见式（l）：8GB/Txxxx—xxxx式中：X——试样中玉米赤霉烯酮的含量，单位为微克每千克（µg/kg）；A——样液中玉米赤霉烯酮的峰面积；Ao——空白样液中