氨基酸含量的测定

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1、氨基酸含量的测定标准曲线绘制准确吸取200ug/ml的氨基酸标准溶液0.0，0.6，0.8，1.0,1.2，1.5，2.0ml，分别置于25ml容量瓶或比色管中，各加水补充至溶剂为4.0ml，然后加入茚三酮和磷酸缓冲溶液各1ml，混合均匀，于水浴上加热15min，取出迅速冷至室温，再摇匀，加水至标线25ml，摇匀。静置15min后，在570nm波长下，以试剂空白为参比液夨订其余各溶液的吸光度A。以氨基酸的微克数为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。样品的测定：将虾研磨冷却过滤后稀释10倍，吸取澄清的样品溶液1.5ml，平行三次，按标准曲线制作步

2、骤，在相同条件下测定吸光度A值，用测得的A值在标准曲线上即可查得氨基酸的微克数。公式：氨基酸总量（ug/100g）=(c/m*1000)*100*10式中c是指从标准曲线上查得的氨基酸的ug数；M是指测定的样品溶液相当于样品的质量g；PH计酸度计测量ph的方法：(1)拿下笔帽(2)按on/off键，机器显示运作(3)将ph计放入待测液中(4)轻轻晃动ph计，保证内气泡逸出，使之于溶液充分接触，勿碰撞杯壁(5)ph计会立即显示数值，将笔置入待测液待数值稳定，30秒内将显示正确数值，(特：ph计数值上下浮动或不稳定是正常现象)(6)按hold键锁定数值

3、，可在待测溶液外记录读取，继续按hold键解除锁定(7)按on/off键关闭ph计(8)轻甩PH计测试笔上多于的水，用蒸馏水或脱离子水冲洗，盖上笔帽测量温度方法在测试模式下，温度数值与ph数值同步显示在液晶面板上，但在校准模式下不显示，数值默认为摄氏温度。（一）挥发性盐基氮（TVB-N）的测定半微量定氮法（1）原理：蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质，有氨、伯胺、仲胺等，此类物质具有挥发性，可在碱性溶液中被蒸馏出来，用标准酸滴定，计算含量。（2）试剂①氧化镁混悬液(10g/L)称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。②硼酸吸收

4、液（20g/L）③0.2%甲基红乙醇液④0.1%亚甲蓝水溶液临用时将③④等量混合为混合指示液⑤0.010mol/L盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液（3）仪器①半微量定氮装置：Markhan氏式②微量滴定管：最小分度0.01ml（4）操作方法①样液的制备：将样品除去脂肪、骨头及筋腱后，切碎搅匀，称取10g于锥形瓶中，加100ml水，不时振摇，浸渍30min后过滤，滤液置于冰箱中备用。②测定：预先将盛有10ml吸收液并加有5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入锥形瓶内吸收的液面下，精密吸取5ml上述样品滤液于蒸馏器反应室内，加

5、5ml1%氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸汽出口管，由冷并行管出现第一滴冷凝水开始计时，蒸馏5min即停止，吸收液用0.0100N盐酸标准溶液或0.0100mol/L硫酸标准溶液滴定，终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。（5）计算X1=V1-V2xN1x14M1x5/100ｘ100式中：X1——样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100gV1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlV2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，mlN1——盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度，mol/LM1——样品质量，g14——

6、1N盐酸或硫酸标准溶液1ml相当氮的毫克水分含量直接干燥法实验仪器1称量瓶2分析天平3电热恒温干燥箱4干燥器操作方法1．将称量瓶清洗干净，瓶盖斜支于瓶边，在101-105烘箱内干燥1.0h。将瓶盖盖好取出，置干燥器中冷却0.5h称量。重复操作至恒重，准确到两次称量值不超过0.2mg。2.样品测定将样品研磨或切碎，称取2-10g(精确至0.0001g)处理好的样品于称量瓶内。将上述样品置于温度预先调节至101-105℃烘箱内，称量瓶盖斜支于瓶边，干燥2-4h。然后将称量瓶盖好取出，放入干燥器内冷却，约0.5h，待温度将至室温后称重。然后再放入101-

7、105℃干燥箱中干燥1h左右，取出，放入干燥器内冷却0.5h后再称重。重复操作至恒重为止（前后两次称重质量差不超过2mg）。实验结果计算按下式计算样品中水分的含量：x%=m1-m2m1-m0x100式中，X------样品中水分含量，g/100gm0----称量瓶质量，g;m1----称量瓶加样品质量，gm2---称量瓶加样品干燥后质量蛋白质凯氏定氮法实验原理：蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘

8、以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。三、仪器与试剂（一）试