涿鹿柳蒿中氨基酸含量的测定.doc

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1、涿鹿柳蒿中氨基酸含量的测定作者：田嘉铭张进顺张进顺【摘要】目的：建立柳蒿中氨基酸含量测定的高效液相色谱方法，并测定柳蒿中氨基酸的含量。方法：HypersilAAAODS色谱柱(2.1mm×150mm5μm)，采用梯度洗脱，检测波长330nm，柱温40℃。结果：线性范围：12.5～50pmoL·μL-1，平均回收率：96.2%～104.6%。结论：该方法快捷、稳定、重复性好，可用于柳蒿中氨基酸的含量测定。【关键词】柳蒿;氨基酸;高效液相色谱法　　【ABSTRACT】Objective：ToinvestigateHPLCmethodinmea

2、suringAminoAcidinArtemisiaselengensisTurcz.,anddetermineaminoacidinArtemisiaselengensisTurcz..Methods：EclipseAAAcolumn(4.6mm×150mm,5μm),usinggradientsolutionandwithdetectionwavelengthat330nm,thetemperatureofcolumnwas40℃.Results：Themethodwaslinerwithintherangeof12.5～50pmoL·

3、μL-1,Theaveragerecoveryofassaywas96.2%～104.6%.Conclusion：Thismethodisfast,reliableandaccurate.ItcanbeusedfordeterminingAminoAcidinArtemisiaselengensisTurcz..　　【KEYWORDS】ArtemisiaselengensisTurcz.,Aminoacid,HPLC　　柳蒿(ArtemisiaselengensisTurcz.)学名狭叶艾，菊科蒿属，多年生植物，以全草入药，秋季采，多鲜用，

4、主治破血行瘀，上下通络，用于产后淤血停积，小腹胀痛，跌打损伤，淤血肿痛，因伤大小便下血。本草纲目草部第十五卷记载：蒌蒿气味甘甜无毒，主治五胀邪气，风寒湿脾，补中益气，长毛发，久食轻身，耳聪目明，防衰[1]。柳蒿的营养价值很高，含有多种氨基酸和维生素，矿物质含量也很丰富，柳蒿含蛋白质14.8%，粗脂肪4.0%，粗纤维21.7%，无氮浸出物38.2%，灰分11.7%，钙1.09%，磷1.05%[2]。柳蒿不仅营养丰富，而且具有食疗和药疗的保健作用，民间还常用于治疗急性传染性肝炎。本实验拟建立柳蒿中氨基酸含量的柱前衍生HPLC测定法，并测定柳蒿中

5、氨基酸含量。　　1材料与方法　　1.1仪器与试剂　　1.1.1仪器HP1100高效液相色谱仪(Agilent公司)，分析天平(1/100000，日本)。　　1.1.2试剂氨基酸标准品(含17种氨基酸)购于Agilent公司;甲醇、乙腈均为色谱纯(Agilent公司)，柳蒿来源于河北涿鹿赵家蓬区，野生，经本院中医系马淑兰教授鉴定。3　　1.2方法　　1.2.1色谱条件　　A液：称取2.7200g含有三个结晶水的乙酸钠，放入1500mL的烧杯中加入1000mL三蒸水，使其完全溶解，然后加入180μL三乙胺，用1%～2%的醋酸调pH=7.2±0.

6、05，再加入3.0mL四氢呋喃，混匀，过0.45μm滤膜。　　B液：称取2.7200g含有三个结晶水的乙酸钠，放入1500mL的烧杯中，加200mL的三蒸水，使其完全溶解，用1%～2%的醋酸调pH=7.2±0.05，再加入400mL甲醇和400mL乙腈，混匀，过0.45μm滤膜。　　OPA衍生法:待检样本200μL，加入200μLOPA，混匀，过0.45μm滤膜，在5min内进样20μL。色谱柱：HypersilAAAODS色谱柱(2.1mm×150mm5μm)，检测波长330nm，柱温40℃，梯度洗脱条件见表1。　　1.2.2标准曲线制

7、作精密吸取氨基酸标准品(100pmoL·μL-1)0.5mL，用0.1mol/LHCl作2，4，6，8，16倍稀释，每个稀释度按上述色谱条件进样20μL，结果以浓度为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y),做标准曲线，得16种氨基酸回归方程，色谱图见图1。表1梯度洗脱条件　1.2.3供试品溶液制备精确称取已真空干燥的柳蒿细粉100.0g，置于500mL圆底烧瓶中，加入适量三蒸水，回流提取2h，滤出提取液，重复提取，合并两次提取液，减压浓缩定容至50mL，过0.45μm滤膜，按照1.2.1项下色谱条件中测氨基酸含量。　　1.2.4精密度实验精密

8、吸取标准品溶液20μL，按上述色谱条件连续进样6次，测定其峰面积，计算RSD为1.40%～2.46%，说明本方法具有较好的精密度。　　1.2.5重复性试验取1号样品5份，按“1.