游离a-氨基酸含量的测定

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1、游离a－氨基酸含量的测定目的与要求实验的重点和难点仪器和试剂基本操作实验原理实验内容数据记录和处理注意事项思考题实验目的与要求1、了解分光光度法测定游离氨基酸的原理与方法；2、掌握分光光度计的使用。重点和难点分光光度计的使用与标准曲线的制作仪器和试剂仪器721型分光光度计恒温水浴槽漏斗25mL比色管5mL吸量管研钵试剂pH＝5.0的缓冲液1％水合茚三酮溶液0.1％抗坏血酸氨基酸标准溶液鲜蘑菇基本操作1）吸量管的使用2）比色管的使用3）721分光光度计计的使用实验原理α－氨基酸在pH=5.0的溶液中与茚三酮共热时，与茚三酮作用生成蓝紫色化合物。该化合物的最大吸收

2、波长为570nm，根据朗伯比尔定律，采用分光光度法测定其吸光度，通过标准曲线法进行定量分析，求出样品中α－氨基酸的浓度。实验内容称1.0g剪碎的新鲜蘑菇放入研钵中，加入2mL蒸馏水，研磨成匀浆，再转入7号25mL比色管，然后用6mL蒸馏水分三次洗涤研钵，分别转入7号比色管，再置于80℃水浴槽加热10分钟后用冷水冷却，再用蒸馏定容至25mL。摇匀后，过滤，将滤液置于8号比色管以备用。1、样品中游离a－氨基酸的提取：2、标准曲线制作：在6支比色管中，按下表顺序与用量加入试剂：比色管号123456V标/mL00.500.101.502.002.50V缓/mL3.00

3、2.502.002.002.002.00V茚/mL2.002.002.002.002.002.00抗坏血酸（滴）444444氨基氮ug/管012.525.037.550.062.5吸光度摇匀后，将上述6支比色管置于80℃水浴槽加热15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。从8号比色管移取1.00mL溶液于9号25mL比色管，在分别加入3.00mL缓冲溶液、2.00mL茚三酮溶液和4滴抗坏血酸，摇匀后置于80℃水浴槽加热15分钟后用冷水冷却，再用缓冲液定容至25mL，摇匀。以1号比色管溶液为参比液测出样品的吸光度，从标准曲线上查到对应的氨基氮的含量，

4、按下公式计算样品中氨基氮的含量：3、样品含量的测定K为查标准曲线所得氨基氮含量（ug）m为样品称取量（g）在坐标纸上画出标准曲线，并查得样品管中的氨基氮含量K值，计算初鲜蘑菇中的氨基氮含量。数据处理1、显色反应应控制在85℃以内，否则溶液易退色；显色反应后在50分钟内应完成测量任务，否则溶液会退色。2、加抗坏血酸可减少氧气对显色影响，但用量要严格控制。3、蒸馏水最好是无氨蒸馏水。4、水合茚三酮不要溅到皮肤上。注意事项1、简述721型分光光度计的操作步骤。2、实验过程为何使用无氨蒸馏水。思考题