Taqman定量PCR技术检测转基因大豆中外源基因拷贝数

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sei．201l，39(17)：10150—10152责任编辑乔利利责任校对况玲玲Taqman定量PCR技术检测转基因大豆中外源基因拷贝数仇有文，张明辉，高学军，曲波，敖金霞，袁肖寒，刘营，霍楠(东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心，黑龙江哈尔滨150030)摘要[目的】采用Taqman定量PCR技术检测转基因杂交大豆中外源／sos终止子基因的拷贝数。[方法】以大豆凝集素基因为内参照基因，以非转基因大豆基因组DNA为内参照基因标准品，通过梯度稀释法分别求取了内参照基因和质粒DNA的

2、cz值与拷贝数对数值的相关性标准曲线方程，并通过将得到的值代入标准曲线方程求取了样品的拷贝数。[结果】内参照基因标准曲线方程为Y=一3．422x+35．201，R=0．998；外源基因标准曲线方程为Y=一3．348x+34．890，R=0．999。rto$终止子基因及其下游边界序列在转基因杂交大豆中为单拷贝。l结论1为确定转基因大豆外源基因拷贝数提供了理论依据。关键词Real—timePCR；转基因杂交大豆；拷贝数；Lectin；no$终止子基因边界序列中图分类号S188．1文献标识码A文章编号0517—6611(2011)17—10150—03DetectionofF

3、oreignGeneCopiesinTransgenicSoybeanbyTaqmanQuantitativePCRTechniqueQIUYou-wenetal(LifeScienceandBiotechniqueResearchCenterofNortheastAgriculturalUniversity／TestingandInspectingCenterforGMO，Harbin，Heilongjiang150030)Abstract[Objective]ItistoadoptTaqmanquantitativePCRtechniquetodetecttheco

4、piesoftbreignnosterminatorintransgeniehybridsoybean．[Method]Withendogenousreferencegeneofsoybeanlectin，andendogenousreferencestandardofgenecomplexDNAinnon—GMOsoybeans，themethodofgradientdilutionwasusedtoseparatelycalculateCtvalueofendogenousre~rencegeneandplasmidDNAandrele—vancestandardc

5、urveequationoflogarithmofcopies，andthentocalculatethecopiesofsamplesthroughsubstitutingthus—obtainedCtintostandardcurveequation．[Result]Thestandardcurveequationofendogenousreferencegeneisy：一3．422x+35．201，．R：0．998；andthestandardcurveequationofforeigngeneis一3．348x+34，890，R=0．999．Nostermina

6、toranditslowerboundarysequencesintransgenicsoybeanisofsinglecopy．[Conclusion]Thestudyhasprovidedatheoreticalbasisfordeterminingforeigngenecopiesintransgenicsoybean．KeywordsReal—timePCR；Transgenichybridsoybean；Copies；Lectin；Boundarysequenceofno$terminatorgene实时荧光定量PCR技术是一种新的DNA定量方法。所；非转基因

7、大豆来自东北农业大学农学院；阳性质粒来自Taqman探针法是在定性PCR的基础上添加一条标记2个荧东北农业大学大豆研究所。光基团的探针，在探针的5端标记荧光剂，3端标记淬灭剂，1．1．2主要试剂与仪器。DLDNA2000分子质量标准和二者可以发生荧光共振能量传递。在探针完整时，发射基团PremixExTaq(PerfectRealTime)购自大连宝生物工程有的荧光信号被淬灭基团吸收，检测系统检测不到荧光信号。限公司；特异引物和探针购自上海英俊生物公司。96孔板购当PCR扩增时，Taq酶的5～3外切酶活性将探针酶切降自AXYGEN公司；Y