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1、第26卷第4期植物研究2006年7月Vo.l26No.4BULLETINOFBOTANICALRESEARCHJu.l,2006转基因白桦外源基因的多重PCR快速检测1*121詹亚光苏涛韩梅孙冬(1.东北林业大学生命科学学院,哈尔滨150040)(2.东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室,哈尔滨150040)摘要根据转化的载体序列上T-DNA中的目的基因bt,选择性筛选标记基因nptⅡ和报告基因gus设计三对特异性引物,PCR产物片断大小分别为247bp、449bp、668bp,应用多重PCR(mut-iple
2、x-PCR)的方法同步检测18株转基因白桦中三个基因的整合状况;用阳性对照为模板,对单重PCR(simplex-PCR)和多重PCR的各项指标进行比较。结果表明多重PCR检测多个外源基因在敏感性方面与单重PCR相比并没有减弱,而且略有提高;对18株样品的多重PCR同步检测无假阳性出现,结果准确,同时在操作中具有减少污染,缩短时间和节约成本等优点。因此,在对转基因白桦的外源基因的定期检测中,多重PCR是一种非常有效而便捷的方法,可以为转基因的拷贝数,T-DNA旁侧序列特征等转基因整合特性方面的研究提供数据。关键词白桦;
3、外源基因;T-DNA;多重PCRAmultiplexpolymerasechainreactionmethodforrapiddetectionofforeigngenesintransgenicbirch(Betulaplatyphylla)1*121ZHANYa-GuangSUTaoHANMeiSUNDong(1.CollegeofLifeScience,NortheastForestryUniversity,Harbin150040)(2.KeyLaboratoryofForestPlantEcology,Mi
4、nistryofEducation,NortheastForestryUniversity,Harbin150040)AbstractAmultiplexpolymerasechainreaction(mPCR)assaywasdevelopedtosimultaneouslyde-tecttargetgene(bt),selectablemarkergene(nptⅡ)andreportergene(gus)ofT-DNAfrom18transgenicbirch.Threesetsprimersweredesig
5、nedandsynthesizedbasedontransferredvectorse-quence.Undertheoptimizedconditions,theassayyieldeda247bpDNAfragmentfrombtgene,449bpDNAfragmentfromnptⅡgene,668bpDNAfragmentfromgusgene.TheresultsofthemPCRusingpositivecontrolshowedthatthesensitiveandsimultaneousdetect
6、ionofforeigngeneswereasnormalassimplexPCRassay,alsoalittlehigher.Aftersimultaneousdetecting18transgenicbirchesusingmPCR,wefoundthatthemethodcoulddecreasetheriskofcontamination,savetimeandreducethecostandsoon.ThemPCRmethodprovidesausefulrapidtechniquefordetectin
7、gmultiplegenesintransgenicbirchandoffersdataontransgeniccopynumber,flankingsequencesoftransgenicT-DNA,andsomeothertransgenicintegrationresearches.Keywordsbirch;foreigngene;T-DNA;mutiplexPCR基金项目:国家自然科学基金资助课题(NO.30471413)第一作者简介:詹亚光(1963)),女,教授,博士生导师,主要从事植物基因工程研究工
8、作。*通讯作者:E-mai:lyaguangzhan@126.com收稿日期:2005-11-304期詹亚光等:转基因白桦外源基因的多重PCR快速检测481多重PCR是指在一个单一反应体系中加入一ladder购自宝生物工程有限公司(Takara大连),对以上的特异引物对,从而同时扩增多个序列的反RNase购自上海华舜生物公司,质粒提取试剂盒和应
