荧光定量PCR对大豆油中转基因成分的检测-论文.pdf

《荧光定量PCR对大豆油中转基因成分的检测-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第3O卷第2期00D&MA~!Itl~SYVol。30，No．22014年3月Mar．2014荧光定量PCR对大豆油中转基因成分的检测DetectionofgeneticallymodifiedcomponentinsoybeanoilbyrealtimePCR付淑君周明解晓红曾林彭新凯杨丽霞F【，Shu-junZHOUMingXIEXiao—hongZENGLinPENGXin—kaiYANGLi—xia(长沙市食品质量安全监督检测中心，湖南长沙410013)(ChangshaCentreofSupervi

2、sion&InspectiononFoodQualitySafety，Changsha，Hunan410013，China)摘要：转基因作物的安全性一直饱受世界争议，作为占据转特异性扩增，且扩增结果不稳定；随着荧光定量PCR仪的普基因作物最大份额的转基因大豆主要用来加工成食用油。及，逐渐采用核酸染料荧光检测的方法，常用的核酸染料为通过传统CTAB法和改良CTAB法分别提取大豆油基因组SYBRGreenI，其可结合双链DNA分子，且荧光信号强度与DNA，并结合实时荧光技术检测内源基因Lectin和外源基双链DN

3、A的数量呈正比，此法在灵敏度上有所提高，且无需因CaMV35S。结果表明：改良法Lectin扩增的Ct值小于传电泳，可实时在线观察扩增结果[7]，但由于SYBRGreenI可统CTAB法，且均检测到外源基因CaMV35S的扩增，改良法提取到的DNA能够满足国家标准对食用油中转基因成分与任何双链DNA结合_8]，故不能排除引物二聚体对结果的检测的要求。影响。鉴于上述原因，探针法成为快速有效检测转基因成分关键词：大豆油；实时荧光技术；转基因成分的最佳手段_g]，此法包含一对PCR引物和一条探针，探针可Abstra

4、ct：Thesafetyofgeneticallymodifiedcropshasbeenacontro—特异性地与模板结合，其结合位点在两条引物之间，探针的versialissueallthetime．Mostofthemaregeneticallymodifiedsoy—5端标记有荧光基团，3端标记有荧光淬灭基团，探针完整beans，whicharemainlyprocessedintooil．WeextractedgenomicDNAfromsoybeanoilthroughtraditionaland

5、improvedCTABmeth—时，荧光基团所发射的荧光能量被荧光淬灭基团吸收，仪器odanddetectedtheendogenousgeneLectinandexogenousgene检测不到信号，随着扩增的进行，Taq酶遇到结合的探针，其CaMV35Sbyrealtimesystem．Itturnedoutthatamplificationfrom3L5外切酶活性会将探针水解，使得荧光基团远离荧光淬灭improvedCTABmethodhadlowerCtandbothmethodshad基团，产生荧

6、光信号。CaMV35Samplification．DNAextractedfromimprovedCTABmeth—odcouldmeetthenationalstandards’requirementsforthedetection目前，食用油脂中转基因植物成分检测主要以聚合酶链ofgeneticallymodifiedcomponentsinsoybeanoil．式反应测定核酸为主’，同时由于食用油脂中DNA含Keywords：soybeanoil；realtimetechnology；genetical

7、lymodified量非常低_5’]，使得成品油中DNA的提取成为制约油类产component品转基因成分检测的瓶颈_1。国内外已有不少对油类样品作为现代科技飞速发展的产物，转基因作物的应用越来DNA提取方法的研究，如JoanaCosta等1]和MatteoBus越广泛_1]，但转基因植物及其制品存在的安全性和环境问coni等_15]分别采用传统CTAB法提取大豆油和橄榄油题也越来越受到人们的关注[3．4]。全球种植的转基因作物DNA，结果提取到的DNA量较少；CatherineBreton等_1尝中，油料作

8、物大豆占的份额最大l_5]。试了包含CTAB法在内的12种DNA提取方法，总结出美国早期油脂中转基因成分的检测方法主要采用普通PCRPromega公司WizardFoodkit的提取效率最高；中国学法]，通过凝胶电泳来判断扩增情况，此法灵敏度低，存在非者[1对于食用油DNA的提取多采用试剂盒法，笔者也试用过美国ABI公司的磁珠法试剂盒MagMAXViralRNAIsolationKit，效果不如本研