大豆中转基因成分的定性PCR检测-论文.pdf

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1、————40中国饲料2013年第20期ll÷。__-墨巨I■一0ll_l一

2、大豆中转基因成分的定性PCR检测南京晓庄学院郭云鹂俞淑芳张风红周红霞【摘要I实验利用CTAB法对大豆DNA进行提取，设计并合成引物对转基因大豆的内源基因Lectin、外源基因CaMV35S启动子、NOS终止子和目的基因Cp4EPSPS基因进行PCR检测，成功建立了大豆中转基因成分的检测方法f关键词1转基因大豆；DNA提取；PCR检测【中图分类号1$816．17[文献标识码1A【文章编号】1004-3314(2013)20-0040—03【Abstract1TheDNAbeforePCR

3、analysiswasextractedfromsoybeanbyCTABmethod．Theextra{：tedDNAfromthesoybeancouldbeusedastemplateforPCRwithprimersforendogenousgeneLectinofgeneticallymodifiedsoybean，CaMV35Spromotergene．NOSterminatorandCp4EPSPSgene．Thusadectionmethodoftrangenicfactorinsoybeanoilwasestablished．【Keyword

4、s】geneticallymodifiedsoybean；DNAextraction；PCRdeteeti{m随着转基因技术的飞速发展，转基冈产品市1．2仪器与试剂PCR仪(BiomeraTGRADI—场不断拓展。越来越多的转基因农产品商品化。转ENT)、Y04S—C型凝胶成像分析系统；CTAB缓基因生物(GMO)抗逆性强、产量高、生产成本相冲液、酚、l二氯甲烷、异戊醇、异丙醇、70％乙醇、对较低。具有较好的市场竞争性和应用前景。但转TE溶液、RNA酶溶液(购自南京天为生物科技基因生物的广泛应用是否会对生态环境和人类及有限公司)、异丙醇、10xPCR反应缓冲液

5、、氯化其他生物的健康造成不良影响，至今仍无定论(金镁(25mmol／L)、dNTP溶液(2．5mmol／L)、引物茺军等，2004)PCR技术手段由于其高效性而成(白行设计，由南京金瑞斯生物科技有限公司提为转基冈食品的最常用检测方法国际通用方法供)、Taq酶(5U／L)、Maker(购白宝生物1二程有是以PCR技术为平台，通过特异扩增转基因调控限公司)原件花椰菜花叶病毒(CaMV35S)启动子、脂肪碱1．3引物设计根据《大豆转基冈成分的定性合酶(NOS)终止子以及目的基因抗除草剂基因PCR检测方法(SN／T】195—2003)》设计了转基[大1Cp4一EPSP

6、S来筛选检测转基因食品(Su等，大豆的Lectin内标基因、CaMV35S启动子基[大l、2003)．．本实验以转基因大豆为原料，采用CTABNOS终止子基因、Cp4EPSPS基冈的引物序列(表法从中提取了基因组DNA设计并合成引物对转1)，基因检测片段的长度分别为ll8、195、l80l，I)基冈大豆的内源基因Lectin，外源基因CaMV35S和320bp(Zhang等，2007；程红梅等，2007)。启动子、NOS终止子和Cp4EPSPS基因进行检1．4实验方法测，为转基因大豆及产品的检测奠定基础。1．4．1大豆DNA的提取采用CTAB提取法．分1材料与

7、方法别称取100mg试样在液氮中充分研磨成粉状至1．1实验材料转基因大豆，由南京农业科学院1．5mL离心管中，同时设空白对照。加入600txL作物科学研究所提供：非转基因大豆为东北大豆。CTAB缓冲液，振荡均匀，65℃温育30min。加人500L酚十三氯甲烷+异戊烷(25：24：l，V／V／V)，振荡均匀，12000fmin离心15min。吸取上清液，放基金项目：2012年度汀苏省大学生实践创新训练计划项日；农业部《转基闪重大项》(2009ZX08012一OI4B)；江苏入另一新管中，加入等体积的异丙醇，12000r／min省教育厅高校自然科学与研究项H(10

8、KJD550005)离心10min。弃去上清夜，加入70％乙醇溶液洗通讯作者涤，l2000r／min离心lmin．．弁去L清夜，f燥，用