多重PCR同时检测鸡AIV_NDV_IBV_ILTV和MG方法的建立和临床应用

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1、广西农业科学2009年第40卷第6期·759·多重PCR同时检测鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG方法的建立和临床应用*黄溢泓，陈强，韦正吉，李志源，盘美妮，黄小武，李璧梅，蒋柳平（柳州市动物疫病预防控制中心，广西柳州545005）摘要：通过建立针对鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG的多重PCR鉴别诊断技术，并进行了特异性、敏感性试验和临床应用。结果表明：设计的5对引物对同一样品中的RNA（AIV、NDV、IBV）和DNA（ILTV、MG）进行多重PCR扩增，均同时得到5条片段大小与设计相符的特异性片段，即268bp（AIV）

2、、321bp（NDV）、457bp（IBV）、662bp（ILTV）和732bp（MG）。说明该多重PCR技术具有较强特异性和较高敏感性，能检测出1pgAIV、1pgNDV、10pgIBV的RNA和1pgILTV、10pgMG的DNA。对自然感染鸡临床样品检测的结果则证明，该技术在临床诊断方面具有广阔的应用前景。关键词：多重PCR；AIV；NDV；IBV；ILTV；MG中图分类号：S858.31；S854.4+3文献标识码：A文章编号：1002－8161（2009）06－0759－05Establishmentandclinicalapp

3、licationofmultiplePCRmethodfordetectingAIV，NDV，IBV，ILTV，MGofchickens*HUANGYi－hong，CHENQiang，WEIZheng－ji，LIZhi－yuan，PANMei－ni，HUANGXiao－wu，LIBi－mei，JIANGLiu－ping（LiuzhouAnimalDiseasePreventionandControlCenter，Liuzhou，Guangxi545005，China）Abstract：Amulti－PCRmethodwasoptimize

4、dtosimultaneouslydetectfivechickenpathogensofAIV，NDV，IBV，ILTVandMG，anditsspecificity，sensitivityandclinicalapplicationwerealsotestedintheexperiment．FivesetsofspecificprimerswhichweredesignedfromthesequencesofAIV，NDV，IBV，ILTVandMGintheGenBank，wereusedinthemulti－PCR．Theresu

5、ltsshowedthatfivespecificfragmentsincluding268bp（AIV），321bp（NDV），457bp（IBV），662bp（ILTV），732bp（MG）couldbeobtainedbymulti－PCRamplificationofsampleRNA（AIV，NDV，IBV）andDNA（ILTV，MG）withthefivepairsofprimers．Whatismore，aslittleas10pgofIBV（RNA）andMG（DNA），and1pgofAIV（RNA），NDV（RNA）

6、andILTV（DNA）couldbedetectedbythismulti－PCRmethod，itindicatedthatthemulti－PCRmethodhadstrongerspecificityandsensitivity．Theclinicalapplicationdetectiononinfectedchickensprovedthatthismulti－PCRmethodcouldbewidelyusedfortheclinicaldiagnosisoffivechickenpathogensincludingAIV，

7、NDV，IBV，ILTVandMG．Keywords：multi－PCR；AIV；NDV；IBV；ILTV；MG禽流感（Avianinfluenza，AI）、鸡新城疫（New-使用常规检测方法（如病原分离鉴定和血清学试验castledisease，ND）、鸡传染性支气管炎（Infectious等），不但特异性差、敏感性低、费时费力，而且不易bronchitis，IB）、鸡传染性喉气管炎（Infectiouslaryn-进行鉴别诊断；另外常规PCR技术也只能对单一病gotracheitis，ILT）和鸡毒霉形体（Mycoplasmagal-

8、原的核酸进行特异性扩增，极大地影响了这些传染［5～9］lisepitcum，MG）是5种给养鸡业带来重大经济损失病的防制。多重PCR是一种特殊PCR形式，可同［1～4］的传染病。它们在临床上具