单管多重PCR鉴定HPV基因型方法的建立和临床评价.doc

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1、单管多重PCR鉴定HPV基因型方法的建立和临床评价作者：曾凡杞，张志云，李永双，冉灵芝【摘要】目的建立单管多重PCR鉴定低危和高危乳突瘤病毒(HPV)的方法以及用临床标本对该方法进行评价。方法设计HPV基因型特异的引物，在一个PCR反应管中PCR扩增来自上皮细胞提取的DNA，然后用毛细管电泳对PCR产物进行分离，根据扩增产物的大小确定相应的HPV基因型。对不同病理期的1094份临床宫颈标本和对照进行了分析。结果一共鉴定了16个HPV基因型，即HPV16,58,52,51,56,31,18,39,66,59,6,33,30,3

2、5,45和11。该方法具有高度的灵敏性和可重复性。同对照相比，未知重要意义的非典型鳞状细胞(ASCUS)、低级别表皮内损伤(LSILs)、高级别的表皮内损伤(HSILs)标本HPV检出阳性率分别为60.5%、77.1%和82.2%，而对照为14.4%，其中在HSILs标本HPV16和HPV58检出率最高，并与细胞恶性程度呈正相关。结论单管多重PCR鉴定HPV的方法是稳定的，且可以用于HPV的流行病学的调查。【关键词】乳突瘤病毒;基因型;多重PCR;毛细管电泳　　ABSTRACT：ObjectiveTodevelopameth

3、odforidentificationofhumanpapillomavirusesbymultiplexPCRinasinglePCRtubeandtoevaluatethismethod.MethodsMultiplexPCRwasbasedontheamplificationofHPVDNAbysetsofHPVgenotypespecificprimers,andthegenotypesofHPVwerevisuallyidentifiedbythesizesofampliconsaftertheyweresepa

4、ratedbycapillaryelectrophoresis.WeconductedapilotstudytoexaminethecorrelationbetweentheprevalenceandgenotypedistributionsofHPVandthecytologicalgroupclassificationsfor1094cervicalsamples.ResultsWedetectedall16HPVgenotypes(types16,58,52,51,56,31,18,39,66,59,6,33,30,3

5、5,45and11)withahighsensitivityandahighdegreeofreproducibility.Comparedwiththegroupofsamplesconsiderednormal(14.4%),therewasasignificantincreaseintheprevalenceofHPVinwomenwithatypicalsquamouscellsofunknownsignificance(ASCUS)(60.5%),lowgradeintraepitheliallesions(LS

6、IL)(77.1%),andhighgradeintraepitheliallesions(HSILs)(82.2%).Theprevalenceanddistributionoftype58werecorrelatedwithcytologicalmalignancies,withthehighestprevalenceinwomenwithHSILs.ConclusionThenovelmultiplexPCRmethoddescribedappearstobehighlysuitablenotonlyforthesc

7、reeningofcervicalcancerprecursorlesionsbutalsoforthecharacterizationofgenotypedistributionsinlargescaleepidemiologicalstudies　　KEYWORDS：Humanpapillomaviruses;Genotype;MultiplexPCR;Capillary4electrophoresis　　HPV家族有100多个基因型，其中30～40个感染黏膜，至少15个HPV基因型与宫颈癌的发生密切相关。宫颈细胞巴氏

8、染色检查使宫颈癌的发病率和死亡率大大下降，如果HPV的DNA检查和巴氏检查联合使用，对于因感染高危型HPV可能发展宫颈癌的诊断非常有意义。本研究旨在建立单一PCR管，用HPV特异性引物多重PCR方法扩增，然后用毛细管电泳分离PCR扩增产物，根据其大小确定相应的HPV基因型，并用该方法评估不