通过PCR进行长片段DNA合成 Use PCR Synthesis Large Fragment DNA

《通过PCR进行长片段DNA合成 Use PCR Synthesis Large Fragment DNA》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、遗!传!"#"$%&’(!)*+,+-."!"!#"##$%!#&!$!’’$研究报告通过!"#进行长片段$%&的合成李炜东!梁布锋!祁自柏!中国科学院武汉病毒研究所$武汉$#’’F)"摘!要!利用GHI合成J.K长片段!4L70,-E6EM/2>-82/B-70J.K1E67>GHI$4M8JGHI"是一种有效的合成长片段J.K的方法’采用一段已知的&’’!"’’DN碱基的J.K片段为GHI模板$根据所要合成的J.K序列可以设计一系列的GHI引物$这些引物都位于模板J.K的&O端$长度为&’!"’DN$且从&O到#O方向顺序重叠$重叠碱基数目为)!!)&$全部

2、引物叠加所得到的J.K正是自己所要合成的J.K’这组引物中最#O端的一条含有一个)/0*P酶切位点$在该位点后面有)&碱基与模板J.K&O端一致的序列’另外还设计一条与该模板匹配的下游引物$引物内也含有一个)/0*P酶切位点’首先采用&O端最右侧的引物与下游引物进行GHI$在GHI进行)’个循环后$以此次GHI的产物为下一轮GHI的模板$该轮GHI采用右侧倒数第二个引物为上游引物$下游引物保持不变’采用类似的方法$完成所有的GHI循环$就可以得到所需要合成的J.K长片段’该方法尤其适合)’’!!’’碱基左右的长片段J.K的快速合成与克隆’关键词!GHI(J.K合

3、成(长片段中图分类号!QFR!!!文献标识码!K!!!文章编号!’!&#(%FF!!!’’$"’#(’#$%(’$’()!"#*+,-.)(/(0123)42135),-$%&MPS-6AJ97>$MPK.T<1A8-7>$QPU6A*0;67(=+*-=*$123/-$#’’F)$<3+-/"&6(-217-#4L70,-E6EM/2>-82/B-70J.K1E67>GHI!4M8JGHI"6E/1E-;13B-0,9:09EL70,-E6E3/2>-;2/>B-70J.K?VE-

4、/W79C-:&’’!"’’D/E-N/62J.K;2/>B-70/EGHI0-BN3-0$/E-26-E9;&O0-2B67/3N26B-2E/2-:-AE6>7-:$/7:0,-E-N26B-2E/2-9X-23/N97-DL97-;29B&O0-2B67/309#O0-2B67/3$0,-7-0J.K6E=1E0C,/0L91C/7009EL70,-E6E?+,-3/E0#O0-2B67/3N26B-29;0,-E-N26B-2E,/E/)/0*PE60-$/7:D-,67:0,-)/0*PE60-0,-2-/2-)&DN9X-23/N0,-&O0-2B6

5、7/39;0,-0-BN3-0?K790,-2:9C7E02-/BN26B-259BN3-B-700,-#O0-2B67/39;0,-0-BAN3-0$/7:,/E/)/0*PE60-099?GHID->671E67>0,-677-2-E0&O0-2B67/3N26B-2/7:0,-:9C7E02-/BN26B-2?K;0-2)’5L53-E9;GHI$1E-0,-N29:1509;0,-GHI/E0,-0-BN3-09;7-Y02917:GHI$D100,6E06B-0,-1NE02-/BN26B-25,/7>-090,-&O0-2B67/3910-2N26B

6、-2?49:90,-GHIE$0633/330,-&O0-2B67/3N26B-2E0/W-N/20670,-GHI?H397-0,-;67/3GHIN29:150/7:)/0*P5100,-926>67/3J.K0-BN3-0$+,-J.KEL70,-E6E59BN3-0-?P0ZE/1E-;133B-0,A9:09EL70,-E6E)’’!!’’DNJ.K;2/>B-70$-X-7B92-397>J.K;2/>B-70?8)+9:2;(#GHI(J.K4L70,-E6E(3/2>-J.K;2/>B-70!!J.K人工合成一直是基因重组工作的一个重候$在保证准

7、确性的前提下$合成大片段长度一般在要环节$一般常见的合成方法就是利用J.K合成"’碱基左右$后者在大量制备J.K时又要求事先仪进行J.K的人工合成$或者采用GHI的方式直具备全长的J.K模板$而如果要合成一个!’’碱接进行特定区域的J.K扩增’前者在合成的时基左右!甚至更长的"的人工设计的J.K片段$采收稿日期!!’’#(’$(’#"修回日期!!’’#()’()&基金项目!北京市科委基金!项目编号*’#’!#’’’))#’"%+,-./012/3456-75-8917:/06979;<-6=67>?!.9?*’#’!#’’’))#’"&作者简介!李炜东!)%"%

8、("$男$湖北武汉人$副