实验13DNA片段的PCR扩增.pptx

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1、DNA片段的PCR扩增浙江省丽水中学李成惠实验13《生物学·选修1》浙科版中央电视台综合频道大型公益寻人行动《等着我》是全国首档国家力量全媒体大型公益寻人节目，也是中央电视台2014年重磅推出的全新公益栏目。DNA的体内复制和体外复制体内DNA复制体外DNA复制体内DNA复制体外DNA复制模板DNA4种dNTPTaq聚合酶（耐高温）引物Ⅰ，引物Ⅱ（DNA）模板原料酶引物亲代DNA4种脱氧核苷酸（dNTP）解旋酶,DNA聚合酶等RNA原则碱基互补配对原则碱基互补配对原则PCR-聚合酶链式反应(polymerasechainreaction

2、）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制。PCR仪PCR实验操作1.每组取81μL已配好的预混液（在标有TaqDNA聚合酶的离心管中）加入到1个0.5ml离心管内，然后按下表依次加入相关液体得到反应液。2.每组取20μL刚配好的反应液（0.5ml的离心管中）加入到1个0.2ml离心管内，加入15μL石蜡封闭体系3.将离心管放入全自动基因扩增仪中，按下面程序设定参数，进行PCR扩增实验反应试剂用量dNTPmixture4μL引物I5μL引物II5μL模板DNA5μL循环过程温度时间循环次数预

3、变性95℃30s变性95℃20s0次或12次或30次退火52℃20s延伸72℃20s保温72℃30s总计0s或780s或1860s问题2经12次复制后可得到多少种分子量不同的DNA片段？其中哪种类型的DNA片段含量最多？问题1复制几次后可得到只含有目的基因的DNA片段？活动：绘制PCR扩增目的基因模式图目的基因活动：绘制PCR扩增目的基因模式图目的基因12次循环后第一次复制第二次复制第三次复制复制三次后出现只含有目的基因的DNA片段30次循环后活动：绘制PCR扩增目的基因模式图问题3扩增获得的这些DNA片段，用怎样的方法来检测或分离目的

4、基因呢？问题2经12次复制后可得到多少种分子量不同的DNA片段？其中哪种类型的DNA片段含量最多？问题1复制几次后可得到只含有目的基因的DNA片段？活动：绘制PCR扩增目的基因模式图目的基因琼脂糖凝胶电泳实验操作1.溶胶2.制胶琼脂糖凝胶电泳实验操作3.加样琼脂糖凝胶电泳实验操作12次循环组30次循环组4.电泳琼脂糖凝胶电泳实验操作5.观察琼脂糖凝胶电泳实验操作DNA图谱观察仪琼脂糖凝胶电泳实验操作琼脂糖凝胶电泳实验原理：1.DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。2.4SRedPlus核酸染色剂能与DNA静电结合。4S

5、RedPlus在紫外光下可获得最佳激发，在DNA图谱观察仪下可看到明显的DNA条带。1溶胶2制胶3加样4电泳琼脂糖凝胶电泳实验操作5观察琼脂糖凝胶电泳实验操作6.分析与讨论0次12次12次30次30次2000bpMarker5000bpMarker0次12次12次30次30次PCR应用-亲子鉴定实验13DNA片段的PCR扩增主要内容1PCR实验条件2PCR实验操作3PCR实验原理4琼脂糖凝胶电泳5PCR的应用THANKS!!Manytraditionalartsarelosingnowadays,becausesomeofthemhav

6、ebeenreplacedbythenewmachinesandthescientificpro.feelsosorryaboutthelosingarts,inmy