《62dna片段的扩增——pcr技术》导学案

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1、《6.2DNA片段的扩增一一PCR技术》导学案［课标要求］1、理解PCR的原理，讨论PCR应用。2、尝试PCR技术的基本操作。［知识梳理］一、背景知识1、细胞内DNA复制步骤：(1)在作用下解开DMA双链(2)在作用下，以DNA单链为模板，合成一段;(两条DNA模板链各需一个R7A引物)(3)以RNA引物为起点，在作用下，以为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新链。2、聚合酶链式反应(PCR)概念;3、PCR过程与细胞内DNA复制过程区别：(1)引物是人工合成的单链，20-30个脱氧核昔酸，而不是RNA。(2)解旋通过对反应的控制来实现而不依靠。4、PCR过程：(1)将PCR缓冲液、、一对引物

2、、四种、DNA聚合酶、Mg?•等成分加入到特制的微量离心管中。(2)高温变性：(3)低温复性：O(4)中温延伸：O二、实践案例1、PCR实验虽然原理复杂，但操作十分简单，因为生物制剂公司已把PCR缓冲液、DM聚合酶、脱氧核背酸贮备液等组分配成了PCR试剂盒，实验人员仅需加入模板DNA及引物即可,所以快速、高效、灵活和易于操作是PCR技术的突出优点。2、材料用具：略3、活动程序(1)加入各种试剂，混合，离心10s,放入PCR仪中。(2)扩增循环，在PCR仪上设置好PCR热循环程序:循环数高温变性低温复性屮温延伸第一次95°C,5min55°C,lmin72°C,lmin30次95°C,30s55

3、°C,30s72°C,lmin最后一次72°C,7min注：反应产物在4°C保存4、检测扩增效果(1)稀释样品10倍(2)以氏0作对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计读数调到零。(3)加入到厚度为lcm的比色杯中，测定260nm处的光吸收值(4)DNA浓度(》g/mL)=02)X稀釋倍数三、探究活动PCR实验虽然操作简单，但实验设备及药品价格较高，可以利用自己准备的简易材料，设计并进行PCR技术的模拟实验操作。四、PCR技术意义PCR能,从而有效地解决了因为样品屮DNA含量而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛应用于、基因序列分析、遗传病诊断，古生

4、物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等。五、小知识：1、DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DM的方向，逋常将DNA的耗基(-011)末端称为5'端。DM聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3'端延伸DNA链。但DM合成的方向是从子链的5'端向3'端延伸。2、引物是一段RA,它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20—30个核首酸。3、在80°C—100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DM链又会重新结合成双链。［复习指导］本节课复习要注重细胞内DNA复制过程和体外DNA片段的扩增一一PCR技

5、术的过程，运用DNA复制过程原理相同的方法，明确体外DNA片段的扩增一一PCR技术在基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等方面的地位和作用。如何在体外创设细胞内DNA复制的条件是PCR技术的关键，细胞内的各种条件实际上是利用PCR仪来模拟的。PCR仪原理复杂，操作简单。［典例解析］1、PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是（）①PCR过程需要的引物是人工合成的DNA单链②PCR过程不需要DNA聚合酶③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制來实现的④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制A、

6、①②③④B、①②C、①③D、②④［解析］PCR过程与细胞内的D7A复制过程相比，主要有两点不同。笫一，PCR过程需要的引物不是RNA,而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20-30个脱氧核昔酸。第二，PCR过程小，DNA解旋不依赖解旋酶，而是通过对反映温度的控制来实现的。［答案］C2、在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（）①模板DM②模板RNA③DNA解旋酶④耐高温的DM聚合酶⑤引物⑥PCR缓冲液⑦脱氧核昔酸贮备液⑧核昔酸贮备液A、①④⑤⑥⑦B、①③④⑤⑥⑧C、②③④⑤⑥⑦D、①④⑥⑦⑧［解析］进行PCR过程前，将PCR缓冲液、DNA模板、一对引物、四种脱氧核昔酸、DNA聚

7、合、驱2+等成分加入到一种特制的微量离心管中。