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《中国仓鼠卵细胞二氢叶酸还原酶基因在大肠杆菌中的高效表达 High-level Expression of CHO Dihydro》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、遗传HEREDITAS(Beijing)18(5):27-301996中国仓鼠卵细胞二氢叶酸还原酶基因在大肠杆菌中的高效表达①蔡勤（中国科学院上海生物工程研究中心，上海200233)徐晋麟（上海交通大学生物科学与技术系，上海200240)摘要本工作采用PCR法将哺乳动物表达载体pSVA75上的中国仓鼠卵细胞（CHO）二氢叶酸还原酶基因扩增后插人到原核生物高效表达质粒pBV221中，构建成胞内表达载体pDHFR-1，经转化大肠杆菌(E.coliDH5的后获高效表达，表达量占总蛋白量的12.2%．利用这种方法不仅为深人研究
2、该酶的结构和功能的关系及其新生肚链的折叠提供丰富的实验材料，而且也有希望成为较好的外源DNA原核扩增表达系统．关键词二氢叶酸还原酶，CHO,PCR,pBV221,高效表达High-levelExpressionofCHODihydrofolateReductaseGeneinEscherichiacoliCaiQin(ShanghaiResearchCenterofBiotechnology,AcademicaSinica,Shanghai200233)XuJinlin(DepartmentofBiologyScien
3、ceandTechnologyofShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200240)AbstractThetechniqueofPCRwasusedtoamplifytheChineseHamsterOvaryDHFRgeneinthemammalexpressionvectorpSVA75,andtheamplifiedfragmentswereinsertedintothevectorpBV221,toconstructthevectorpDHFR-1．TheCHOdh斤wastr
4、ansformaedintoE.coliDH5aandhigh-levelex-pressed.Thescanningresults(scannedbyLKBEnhancedLaserDensitometer)showedthattheexpressionlevelhadreached12.2%ofthetotalcellularproteins.Therefore,thisprovidesanabundantexperimentalmaterialforstudyingtherelationshipbetweenth
5、eproteinconstructandfunction,andforstudyingthebi-ologyofthenascentpeptidechainduringbiosynthesis.Thispathwaymaybeagoodexpressionsystemofprokaryocyteforamphifingeukaryoticgene.KeywordsDihydrofolatereductase,ChinesesHamstersOvery,PCR,pBV221,High-levelexpression二氢叶
6、酸还原酶田ihydrofolateReductase,EC1.5.13DHFR）广泛存在于各种生物中，在核昔酸合成中起着重要的作用．在分子克隆中，DHFR不仅是哺乳动物体外重组的重要选择标记，也是主要的外源DNA共扩增系①本工作在中国科学院生物物理研究所静国忠研究员的指导下完成，特此致谢．28遗传HEREDITAS(Beijing)199618卷统．由于其分子量小，除了质粒R67编码的DHFR为两个亚基组成以外，其余各种来源的DHFR皆为单体〔5,11,12,14,17,19)，因此，DHFR也是研究酶蛋白三维结构和功
7、能关系的一种较好的模型．三甲氧节二氨嘀吮(Trimethoprim),氨甲蝶吟(Methotrixate)、喻吮甲胺鞍(Pyrimethamine）已成为抗肿瘤、抗菌及抗疟疾的重要药物，而DHFR却是这些药物的靶酶(8,10)。自70年代以来，dh户基因的分子克隆工作报告颇多，其主要研究方向在以下4方面：(1)dhfr基因的结构〔5,16,19);(2)dh斤基因的表达（3,6,9,16,20);(3)dh户基因的扩增〔9).(4)dhfr基因的定位〔’”．真核dhfr基因表达既有真核表达系统⑥，也有原核表达系统．在原
8、核表达系统中所用的表达载体如pPL608(在枯草杆菌中表达）(3,5)、pBR322(在E.coli中表达）(3,16，等，至今尚未见到用载体pBV221在E.coli中进行表达．pBV221是一种含有噬菌体A双启动子PRPL高效表达载体（(4)，曾被用于金黄色葡萄球菌核酸酶R(StaphulococcaluncleaseR,SN
