非水毛细管电泳法测定山楂果实中的绿原酸和咖啡酸

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1、http://www.paper.edu.cn非水毛细管电泳法测定山楂果实中的绿原酸和咖啡酸禹凯，朱金花，陈兴国兰州大学化学化工学院，兰州（730000）E-mail：chenxg@lzu.edu.cn(X.Chen)，yuk05@lzu.cn摘要：本文建立了分离和测定山楂果实中绿原酸和咖啡酸的非水毛细管电泳方法。分离介质（缓冲液）为：35mMTris-0.7%醋酸的甲醇溶液，分离电压为-25kV。在此最佳条件下，两种分析物可在10min内实现基线分离。两种分析物的线性范围为20-200µg/ml，连续运行5次的迁移时间和峰面积的相对标准偏差(R.S.D.)分别为：2.8

2、2%和2.29%(日内)；4.02%和3.14%(日间)。样品中分别加入25，50，100µg/mL绿原酸标准溶液测得绿原酸的回收率为98.7%、98.2%和97.5%；加入25，50，100µg/mL咖啡酸标准溶液测得咖啡酸的回收率为95.6%、102.5%和99.4%。此方法简单、快速，具有比较好的精密度、回收率和线性关系。本实验的方法也可应用于测定植物中的其他有机酸成分。关键词：绿原酸，咖啡酸，有机酸，非水毛细管电泳1.前言山楂，又叫“山里红”、“胭脂果”，它具有很高的营养和药用价值。山楂含多种维生素、绿原酸、咖啡酸、酒石酸、柠檬酸、山楂酸、齐菊果酸等，还含有黄酮类

3、、内酯、糖类、蛋白质、脂肪和钙、磷、铁等矿物质。由于山楂含山楂酸等多种有机酸，味酸甘，并含解脂酶，入胃后，能增强酶的作用，促进肉食消化，有助于胆固醇转化。所含的解脂酶能促进脂肪类食物的消化，促进胃液分泌和增加胃内酶素等功能。中医认为，山楂具有消积化滞、收敛止痢、活血化淤等功效。主治饮食积滞、胸膈痞满、疝气血淤闭经等症。山楂中含有萜类及黄酮类等药物成分，具有显著的扩张血管及降压作用，有增强心肌、抗心律不齐、调节血脂及胆固醇含量的功能[1-3]。绿原酸(chlorogenicacid)化学名称为3-咖啡酰奎尼酸，分子式为C16H18O9。绿原酸具有抗菌、消炎、解毒、利胆、降压

4、和升高白细胞及显著增加胃肠蠕动和促进胃液分泌等药理作用，对大肠杆菌、金色葡萄球菌、肺炎球菌和病毒有较强的抑制作用；对急性咽喉炎症和皮肤病有明显疗效，临床上用于治疗急性细菌性感染疾病及放化疗时所致的白细胞减少症，对月经过多，子宫功能性出血有良好的止血效果[4]。咖啡酸(caffeicacid)分子式C9H8O4，具有广泛的抑菌作用[5-7]。液相色谱、毛细管电泳已经用于测定山楂中的成分[24-36][8-20]。虽然液相色谱是一项成熟的技术具有较高的精密度和准确度，已经广泛应用于物质的纯化和制备，但仍存在分析时间较长、消耗样品和溶剂多、柱子易污染等缺点。毛细管电泳(capi

5、llaryelectrophoresis，CE)是近年来发展迅速的一项分析技术，具有分析效率高、分析速度快、样品用量小和运行费用低的特点，已经广泛应用于各种复杂体系的分离分析。分离成分主要包括生物碱、黄酮、苷类、有机酸、香豆素、木脂类、醌类[21-23]。CE的分离通常是在水溶液中完成的，这限制了分析物的使用范围。为拓宽毛细管电泳的分析范围，可在分离介质中加入表面活性剂等来加以调节，但仍要求被分析物在水中具有足够的溶解度。对在水溶液中溶解度很小的被分析物，通常在毛细管壁上的吸附也非常明显，且-1-http://www.paper.edu.cn用来调整分离条件的实验参数有一

6、定的局限性。直到1994年，Sahota和Khaledi[24]报道了用甲醇和N-甲基甲酰胺作分离介质，对比研究了非水与水毛细管电泳在效率、分离时间和选择性的不同。与此同时，Ng和Tomlinson研究组报道了非水毛细管电泳(NACE)的实际应用[25-27]。自此以后，非水毛细管电泳引起了人们注意并得到了广泛应用，已成功应用于药物与其代谢物、蛋白质、肽类、手性化合物、脂肪酸、表面活性剂以及有机离子和无机离子等的分离[28-33]。利用有机溶剂物理化学性质上的不同特性，用其作为NACE分离介质具有多方面的优势：(1)对在水溶液中难溶而不能用CE分离的对象，在有机介质中有较

7、高的溶解度而实现CE分离，拓宽了分析范围，如不溶于水的多环芳烃也能利用NACE进行分析[34]；(2)NACE能改善分离度，增加选择性。在非水条件下，溶质的溶剂化、离子对效应和复合物的形成与水相中有很大的不同，在水介质中迁移速度相近的溶质在非水介质中的迁移时间能发生改变，甚至完全改变分离顺序，因而使在水介质中难以分离的物质分离度增加，可更好地选择性测定[35]；(3)NACE增多了可优化参数的个数，如非水介质的极性、介电常数、粘度等。故仅通过简单地调节背景电解质的构成，许多分离参数，比如分辨率、分离时间、选择性就能得到轻微甚至