茯苓多糖酶水解条件的研究

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1、http://www.paper.edu.cn茯苓多糖酶水解条件的研究边超陈福生*(华中农业大学食品科学技术学院武汉430070)摘要：茯苓多糖是茯苓的最主要成分，分子量大，不溶于水，无生物活性。本研究采用酶法水解茯苓多糖，降低分子量，增加水溶性，以期获得具有生物活性的水溶性茯苓多糖。通过对酶水解温度、pH值、底物浓度、酶用量和水解时间等的优化，得出最佳水解条件为温度55℃，pH4，底物浓度4％，酶用量2U/mL，水解时间6h，在此条件下，水溶性茯苓多糖得率为57.9％。体外抗肿瘤实验结果显示该水溶性茯苓多

2、糖具有较好的抑制肿瘤细胞生长的生物活性。关键词：茯苓多糖；酶水解；水溶性多糖中图分类号：Q814.9StudyontheHydrolyzationConditionsofPachymanwithEnzymeBianChaoChenFu-sheng*(CollegeofFoodScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversityWuhan430070)Abstract：Pachyman,whichhasnobio-activitiesbecauseofitsg

3、reatmolecularmassandwater-insolubility,isthemajorcomponentinFuling,whichisthesclerotiumofPoriacocos.Inordertogetthebio-activefractionsofpachyman,someenzymeshasbeenusedtohydrolyzepachymantodecreasethemolecularmassandtoincreasewater-solubility.Theoptimalcond

4、itionswere55℃,pH4,substrateconcentration4%,enzymeadded2U/mLandhydrolyzationtime6h,inwhichthegottenrateofwatersolublepachyman(WSP)wasupto57.9%.AndWSPshowedantitumoractivitiesinvitroexperiment.Keywords：pachyman;enzymehydrolyzation;watersolublepachymanfractio

5、n[1]茯苓为茯苓菌(Poriacocos)的菌核，是我国传统中药中的“四君八珍”之一。但是在中药煎煮的过程中，只有茯苓的水溶性成分得到了利用，含量达茯苓干重84％的茯苓多糖(pachyman)则作为废[2]渣而被丢弃。茯苓多糖是主链为β-(1→3)结构并具有β-(1→6)支链的大分子葡聚糖，与具有生物活[3,4][5]性的香菇多糖结构非常相似，但是由于不溶于水而无生物活性。通过羧甲基化和硫酸酯化等化[6-8]学方法增加其水溶性，可获得具有抗肿瘤、抗诱变和增强免疫等功能的衍生物。但是，用化学方法获得的茯苓多

6、糖可能存在有害残留等安全隐患，对环境影响也较大。研究证明，降低β-(1→3)葡聚糖的分子量，增加水溶性，可以提高其生物活性，常用的方法有酸[9-11]降解、Smith降解、超声波降解和酶水解等，而用水解酶降低多糖分子量可以较其它方法得到较[12,13][14]均一的水解产物。有报道用酶水解方法对褐藻胶多糖进行了研究，但对茯苓多糖的水解未见报道。本研究用酶法水解茯苓多糖，降低分子量，提高水溶性，以期获得具有生物活性的水溶性茯苓多糖。*通讯作者，Tel:027-87282927,E-mail:chenfs@ma

7、il.hzau.edu.cn1http://www.paper.edu.cn1材料与仪器1.1材料茯苓片：产自湖北罗田，自然晾干，白色，未经炮制，购于武汉刘有余药堂有限责任公司。β-(1→3)葡聚糖水解酶：A、B、C、D共四种，购自Novozymes公司。以实验条件下，每分钟分解茯苓多糖产生1µg水溶性茯苓多糖定义为1个酶活单位(U)。[15]羧甲基茯苓多糖(CMP)：按照陈春霞的方法自制。瘤细胞株：S180和Hela细胞购自华中科技大学同济医学院。1.2主要试剂和仪器溴化-3-(4,5-二甲基-2-噻唑基

8、)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)，重蒸馏苯酚，三氯甲烷，正丁醇，二甲亚砜等均为分析纯试剂。SDⅡ显微成像系统，苏州松下系统科技有限公司。QM-1SP04行星型球磨机，南京大学仪器厂。MK3型酶标仪，芬兰雷勃。2方法[16,17]2.1茯苓多糖的分离提取茯苓片于40℃烘干，粉碎，过40目筛，得茯苓粉末。取50g粉末以乙酸乙酯和丙酮分别进行索氏提取4h脱脂。脱脂后的粉末浸于0.9％NaCl溶液中过夜，并以沸水煮沸3