烟色曲霉发酵产壳聚糖酶条件的研究.doc

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1、烟色曲霉发酵产壳聚糖酶条件的研究　　摘要：以壳聚糖为惟一碳源从采集的土样中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株，经初步鉴定为烟色曲霉。对测定壳聚糖酶活力的ＤＮＳ法以及该菌株发酵产酶条件进行了初步研究。结果表明，ＤＮＳ法的最大吸收波长在４９０ｎｍ左右，试验菌株的最适产酶发酵条件为分别以1.00%壳聚糖和1.00%牛肉膏为碳源和氮源，２５０ｍＬ三角瓶装液量为７５ｍＬ，起始ｐＨ值是５．８，接种量１．５％，３８℃，２１０ｒ／ｍｉｎ培养７７ｈ。在最适产酶条件下，该菌株发酵液中壳聚糖酶活力可达到７．２５Ｕ／ｍＬ。　　关键词：烟色曲霉；壳聚糖酶；发酵条件；酶活

2、　　中图分类号：Ｑ９３９．５文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11403－0576-04　　　　StudyontheConditionsofFermentingChitosanasefromAspergillusfumigatus　　　　ＴＵＳｈａｏ－ｙｏｎｇa，ＤＥＮＧＹａ－ｌｉa，ＹＡＮＧＡｉ－ｈｕａb，ＺＨＥＮＧＸｉａｎ－ｌｉa，ＷＡＮＧＹａｎｇa　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｓｏｉｌｓａｍｐｌｅｓｕｓｉｎｇｃｈｉｔｏｓａｎａｓｔｈｅｓｏｌｅｃａ

3、ｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ，ａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓＤＮＳｍｅｔｈｏｄｔｈａｔｍｅａｓｕｒｅｓｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅｆｒｏｍｔｈｉｓｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍａｘｉｍｕｍａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆＤＮＳｍｅｔｈｏｄｗａｓ4９０ｎｍ；ａｎｄｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｆｏｒｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅｐ

4、ｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｕｓｉｎｇ1.00%ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅａｎｄ1.00%ｂｅｅｆｅｘｔｒａｃｔａｓｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅ，２５０ｍLｆｌａｓｋｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ７５ｍLｍｅｄｉｕｍ，ｉｎｉｔｉａｌｐＨｖａｌｕｅ５．８，ｃｕｌｔｕｒｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｔ３８℃，ｉｎｏｃｕｌｕｍａｍｏｕｎｔ１．５％ａｎｄｓｈａｋｉｎｇｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｔ２１０ｒ/minｆｏｒ７７ｈｏｕｒｓ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｕｌｔｉｖｉｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，tｈｅｃｈｉｔｏｓａｎ

5、ａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ７．２５Ｕ／ｍL．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ；ｃｈｉｔｏｓａｎａｓｅ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎ；ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ　　　　壳聚糖是甲壳素脱乙酰化产物，是自然界中惟一的一种天然阳离子高聚物［１］。壳聚糖被誉为人体第六生命要素，在食品、化妆品、医药等领域有广泛的用途［２］。壳聚糖来源丰富，但由于分子量大，不溶于水和普通的溶剂，只能溶于酸性环境，致使它在各行业的应用受到了很大的限制［３］。　　壳寡糖是壳聚糖降解的产物，不仅具有水溶性好、易吸

6、收等优点，还具有抗肿瘤、抗菌、免疫激活等独特的生理功能［４，５］，其应用前景广阔。　　壳聚糖酶是催化壳聚糖降解为壳寡糖的专一性酶。壳聚糖经壳聚糖酶降解后生成低分子量的壳寡糖，壳聚糖酶在降解壳聚糖、生产壳寡糖中发挥重要的作用［６］。壳聚糖酶是以壳聚糖为专一性底物的专一性水解酶，专一水解壳聚糖，该酶反应条件温和，为大规模生产壳寡糖提供了可能［７，８］。　　本试验从土壤中筛选分离出了一株产壳聚糖酶活力高的菌株，对其进行了初步鉴定，并对酶活测定的ＤＮＳ法和产酶条件进行了研究。　　１材料与方法　　１．１菌株　　酶源菌株由本实验室自土样中分离得到。　

7、　１．２培养基　　平板分离培养基［单位：％，下同］，组分配方为胶体壳聚糖１．００、２ＳＯ４０．５０、Ｋ２ＨＰＯ４０．２０、ＮａＣｌ０．５０、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．１０、琼脂２．００，ｐＨ值自然。斜面培养基，组分配方同平板分离培养基。复筛培养基，组分配方为胶体壳聚糖１．００、葡萄糖０．１０、酵母提取物０．５０、２ＳＯ４１．００、Ｋ２ＨＰＯ４０．０７、ＫＨ２ＰＯ４０．０３、ＮａＣｌ０．５０、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．０５，调ｐＨ值为６．０。正交优化培养基，组分配方为胶体壳聚糖１．００、牛肉膏１．００、葡萄糖０．１０、酵母提取物０．５０、Ｋ２Ｈ

8、ＰＯ４０．０７、ＫＨ２ＰＯ４０．０３、ＮａＣｌ０．５０、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ０．０５。培养基灭菌条件为１２１℃，２０ｍｉｎ；胶体壳聚糖用１１５℃、２０ｍｉｎ条件单独灭菌。　　１．３试剂　　壳聚