固体发酵黑曲霉产单宁酶的研究硕士学位论文

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1、贵州大学硕士研究生学位论文固体发酵黑曲霉产单宁酶的研究目录目录i中文摘要iAbstractii第一章文献综述11.1引言11.2单宁酶的性质21.2.1单宁酶的理化性质21.2.2单宁酶的酶学性质21.3单宁酶分离纯化及菌株筛选31.4单宁酶的酶活力测定41.5单宁酶的固定化51.5.1固定化酶的方法和特性51.5.2单宁酶的固定化51.6单宁酶的应用61.6.1应用于食品工业61.6.2制革工业71.6.3饲料工业71.6.4化妆品工业71.6.5精细化工与制药工业71.7本课题立题意义和研究内容81.7.1本课题的立题意义81.7.2

2、本课题的研究内容8第二章产单宁酶黑曲霉菌株的诱变及筛选102.1前言102.2材料与设备102.2.1菌种102.2.2培养基102.2.3实验仪器112.3实验方法122.3.1实验菌种的培养及初步鉴定122.3.2出发菌株的筛选122.3.3紫外诱变132.3.4复筛方法132.3.5粗酶液的提取132.3.6酶活测定方法132.3.7单宁酶高活性菌株的产酶稳定性132.4实验结果与讨论142.4.1实验菌种的初步鉴定142.4.2出发菌株的筛选142.4.3紫外诱变筛选单宁酶高活性菌株15562.4.4单宁酶高活性菌株产酶稳定性16

3、2.5本章小结17第三章单宁酶活力测定方法的构建183.1前言183.2实验材料与方法183.2.1菌种183.2.2培养基193.2.4试剂193.2.5仪器193.2.5实验方法193.3实验结果与讨论213.3.1没食子酸吸收峰波长213.3.2没食子酸标准曲线及其回归方程223.3.3单宁酶活力测定233.3.4单宁酶活力测定方法比较233.4本章小结24第四章固体发酵黑曲霉产单宁酶研究264.1前言264.2实验材料与方法264.2.1菌种264.2.2培养基264.2.3试剂274.2.4仪器274.2.5实验方法274.3实

4、验结果与讨论304.3.1液体发酵法与固体发酵法的比较304.3.2黑曲霉产单宁酶固体发酵单因素条件研究314.3.3响应面优化结果354.4单宁酶产酶活力曲线394.5结论40第五章单宁酶的固定化415.1前言415.2实验材料415.2.1菌种415.2.2试剂425.2.3仪器425.3实验方法425.3.1单宁酶粗酶液的提取425.3.2单宁酶酶活测定425.3.3以海藻酸钠为载体固定化单宁酶固定化方法的选择425.3.4固定化单宁酶条件的优化435.3.5固定化酶性质的研究445.4实验结果与讨论455.4.1海藻酸钠为载体固定

5、化单宁酶固定化方法的选择45565.4.2固定化单宁酶的条件研究455.4.3固定化酶的最适温度495.4.4固定化酶的热稳定性505.4.5固定化酶的最适ph505.4.6固定化酶的贮藏稳定性515.5本章小结51第六章结论与展望526.1结论526.2展望53参考文献5456中文摘要单宁酶全称是单宁酯酰水解酶（Tannase,EC3.1.1.20），它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。单宁酶用途广泛，主要来源于微生物，目前研究得较多较为深入的是青霉和黑曲霉。本论文利用紫外诱变的方法选育到一株产单宁酶的黑曲霉

6、菌株，对该菌株固体发酵产单宁酶的发酵工艺条件及发酵培养基进行了优化，研究确立了固体发酵所产单宁酶的酶活检测方法，论文还对产单宁酶的黑曲霉菌株发酵产单宁酶的固定化进行了研究。页：1本研究采用紫外诱变的菌种选育手段进行黑曲霉菌株的诱变，用在平板培养基中加入微量的的溴酚蓝（0.004%），利用黑曲霉生长形成的变色圈大小对菌株进行筛选，成功的选育到了一株产单宁酶达92U/mL的黑曲霉高产菌株。它的单宁酶活性较原始出发菌株提高了1倍多。页：1论文首先研究和建立了适合固体发酵所产胞外单宁酶活性的检测方法。此方法是根据没食子酸（单宁酶催化没食子酸丙酯水

7、解产生）与甲醇绕丹宁之间形成色团物质的方法来测定单宁酶的活性，没食子酸丙酯做底物显色明显，选择520nm波长下检测，成功的避开了干扰物质的吸收峰波长，减小了误差，该方法对底物纯度要求低，常规实验室的仪器就能进行检测，具有简便直观、灵敏准确、重复性好的特点。页：1对选育的产单宁酶黑曲霉菌株进行固体发酵产单宁酶研究，结果表明产单宁酶的最适氮源为NH4NO3，对发酵培养基进行单因素优化结果表明：每5g培养基基质含1％NH4NO3；0.1％NaCl；0.1％MgSO4；8％五倍子；90%麸皮。对发酵条件的单因素优化后得到：初始水分含量50％，初始

8、ph6.0，温度300C为最佳产酶条件。利用响应面方法对显著影响产单宁酶的培养基及培养条件因素进行优化，得到固体发酵黑曲霉诱变株最佳产单宁酶酶条件为：五倍子含量为9.5％；氮源NH4NO3添加