神经干细胞的单层培养及分化过程中HES1和MASH1的表达变化

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1、CMYK第35卷第1期中山大学学报（医学科学版）Vol．35No．12014年1月JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY（MEDICALSCIENCES）Jan．2014神经干细胞的单层培养及分化过程中HES1和MASH1的表达变化刘菲菲111*112，徐丽萍，龙大宏，陈艳，张君度，龙静怡（1．广州医科大学人体解剖教研室，广东广州510182；2．南方医科大学2011级临床医学本科班，广东广州510515）摘要：【目的】建立神经干细胞（NSC）体外培养方案，使NSC的体外可以得到增殖和分化，并检测NSC分化过程中H

2、ES1和MASH1的表达变化。【方法】无菌条件下取SD大鼠胚胎端脑，无血清悬浮培养，形成P2代神经球后，将神经球消化成单细胞，分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养，并对两种不同培养方式下的NSC进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度（20、40、80μg／L）的脑源性神经生长因子（BDNF）诱导NSC分化，选出最合适的浓度。用BDNF最佳诱导浓度诱导NSC分化，Q－PCR检测分化过程中HES1和MASH1的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的NSC；分化3d后，在不加入任何诱导因素的情况下，单层贴壁培养的NSC能更高比

3、例［（19．55±1．09）％］地分化为β－tubulinⅢ阳性细胞；BDNF40μg／L能诱导出更多的β－tubulinⅢ阳性细胞［（34．17±0．60）％］；在分化1、3和7d时，Q－OCR结果表明MASH1在BDNF诱导下组较NSC和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元，BDNF为40μg／L时能诱导出更高比例的神经元，BDNF可以诱导MASH1在NSC分化过程中表达明显上升。关键词：神经干细胞；神经球；单层贴壁培养；分化；脑源性神经生长因子中图分类号：R322．8文献标志码：A文章编号：

4、1672－3554（2014）01－0018－07CulturDOI:10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2014.0004eofNeuralStemCellinVitroandtheExpressionChangesofHES1andMASH1duringDifferentiation111*112LIUFei-fei，XULi-ping，LONGDa-hong，CHENYan，ZHANGJun-du，LONGJing-yi（1．DepartmentofHumanAnatomy，G

5、uangzhouMedicalUniversity，Guangzhou510182，China；2．DepartmentofClinicMedicine，Grade2011，NanfangMedicalUniversity510515，Guangzhou）Abstract：【Objective】CulturingofNSCinvitrowereinvestigated，inwhichNSCcouldproliferateanddifferentiate．TheexpressionchangesofHES1andMASH1weredet

6、ectedduringthedifferentiationofNSC．【Methods】Thecerebrumsofratembryoswereseparatedinsterileworkingconditionandculturedinserum-freemedium．Whenthesecondaryneurosphereswereformed，Accutasedigestedthemintosinglecells．Thentheyweredividedintotwoparts，onewasculturedwithsuspensio

7、nneurospheres，theotherwasplatedtoadherentmonolayer．Andtheabilitiesof“stem”and“differentiation”intwomethodswereexamined．NSCwereinducedwithdifferentconcentrations（20，40，80μg／L）ofbrain-derivedneurotrophicfactor（BDNF）todifferentiation，thebestonewasdetermined．Afterinduceddif

8、ferentiationofNSCinthepresenceofBDNF，theexpressionchangesofHES1andMASH1weredetected．【Results】NSCwereobtaininbo