汉防己甲素干预白血病细胞获得性多药耐药的研究

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1、江苏大学硕士学位论文摘要目的：1．运用化疗药物阿霉素(doxombicin，DOX)处理白血病细胞株心62，诱导获得性耐药的产生，以此模型为基础将中药汉防己甲素(tetran嘶ne，1]m)与诱导剂量的阿霉素联合作用于1662细胞，观察细胞mdrl基因和P-糖蛋白(P—glycoprotein，P-gp)表达水平，检测P．gp的功能状态，验证汉防己甲素对阿霉素诱导的多药耐药的干预效果；2．从mdrl基因的转录调控机制着手在基因、蛋白表达以及转录因子活性三个水平探讨汉防己甲素干预mdrl基因过表达的机制，并初步探讨细胞凋亡在耐药

2、干预过程中的作用。方法：1．采用四唑蓝(MTT)比色法观察汉防己甲素对白血病细胞l为62的毒性作用，计算并选取汉防己甲素对飚62细胞的IC5、IClo、IC20进行以下实验；2．以O．瞰咖l阿霉素单用或O．舡∥ml阿霉素联合不同浓度的汉防己甲素(O．5、1．毗∥ml、2．毗∥m1分别为IC5、lClo、IC20)为处理因素作用于飚62细胞；3．采用逆转录多聚酶链反应(1灌PCR法)检测mdrl、NF．1CB、c-jun、YB．1、survivin基因的mRNA表达水平；4．用流式细胞术(nowcytomet巧，FCM)检测各组

3、细胞的P-gp表达水平；5．用胞内罗丹明123(Rh0123)潴留试验检测处理前后P．gp的功能状态；6．用免疫印迹反应(Wrestemblot法)检测飚62细胞中转录因子NF．KB、c-jun、Ⅶ．1的核内蛋白表达量的改变；7．用凝胶迁移滞后实验(EMSA)方法检测各组细胞中转录因子NF．1(B、c．iun与DNA的结合活性；8．用AnnexinV法江苏大学硕士学位论文检测阿霉素和汉防己甲素分别单独作用以及两者联合作用对瞄62细胞凋亡的影响。结果：1．与空白对照飚62细胞相比，O．舡∥ml阿霉素作用24h可诱导mdrlmRN

4、A表达的上调(尸O．05)，1∥∥ml汉防己甲素与阿霉素联合作用后mdrlm对妊的表达低于阿霉素单独作用组(P

5、码产物P—gp的过表达，汉防己甲素与阿霉素联合作用组P．gp的表达明显被抑制俨

6、作用组NF．KB蛋白核内表达与空白对照组相比上调2．05倍，联合作用组的蛋白表达较阿霉素单独作用组下调了49％，EMSA结果显示：阿霉素单独处理组NF．KB与DNA的结合较空白对照组减少，而汉防己甲素与阿霉素联合作用Il江苏大学硕士学位论文组NF．KB与DNA的结合较阿霉素单独作用组增加；5．阿霉素单独作用后细胞内c-junmRNA和蛋白表达下调(P

7、c—jun蛋白的表达水平较阿霉素单独作用组增加3．64倍，EMSA结果显示：阿霉素单独处理组c．iun与DNA的结合较空白对照组减少，而汉防己甲素与阿霉素联合作用组c-jun与DNA的结合较阿霉素单独作用组增加；6．阿霉素单独作用后细胞内YB．1mRNA和蛋白表达与空白对照组相比有所增加俨O．05)，阿霉素单独作用组与联合作用组的YB．1蛋白细胞核内表达分别比空白对照组上调了2．72、2．80倍；7．阿霉素单独作用组sur

8、vivinmRNA表达与空白对照组无明显变化俨>O．05)，汉防己甲素与阿霉素联合作用组suⅣivinmRNA表达较阿霉素单独作用组和空白对照组减少(P