汉防己甲素联合托瑞米芬逆转k5622fa02细胞多药耐药的研究

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1、中文摘要中文摘要汉防己甲素联合托瑞米芬逆转K562／A02细胞多药耐药的研究东南大学临床医学院检验诊断学研究生赵秋霞导师陈宝安目的本课题旨在研究汉防己甲素(Tetrandrine，Tet)、雌激素受体抑制剂托瑞米芬(Toremifene，Tor)单独及联合应用对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02表达P糖蛋白(P一出ycoprotein，p-gP)的多药耐药基因(mdrl)mRNA、抗凋亡基因SurvivinmRNA表达的影响，以探讨它们逆转多药耐药的作用机理，为汉防己甲素和雌激素受体抑制剂托瑞

2、米芬作为耐药逆转剂的临床应用提供理论依据。方法(1)采用甲基四唑蓝法(MTT)法检测Tor(2+5¨mol／L)及Tet(1tXmo／L)单独及联合作用于K562细胞和K562／A02细胞一定时间阿霉素(ADM)对细胞的半数抑制量：(2)采用半定量PCR(RT-PcR)法检测K562细胞，Tor(2．59mol／L)及Tet(111mo／L)单独及联合作用于K562／A02细胞一定时间多药耐药基因(mdrl基因)mRNA表达水平、抗凋亡基因SurvivinmRNA表达水平：(3)采用流式细胞仪(FCM)检测K562细胞，Tot(2．5

3、1Xmol／L)及Tet(11Xmo／L)单独及联合作用于K562／A02细胞～定时间细胞膜上P，gp的表达、细胞内ADM浓度、细胞的凋亡率。结果(1)逆转剂处理前后ADM对K562细胞和K562／A02细胞的毒性作用：OK562／A02、K562细胞IC50值分别为57．43+4．55mg／L和1．16i0．05mg／L；②Tor及1H单独及联合处理对K562细胞IC50值无明显影响；③Tor及Tet单独处理K562／A02细胞的IC50值分别为20．744-1．62mg／L和14．12a：1．20mg／L，两药联合其IC50值降为

4、9．14：L1．03mg／L；(2)对照组K562／A02细胞48h凋亡率为2．20士O，04％，经1m∥L的ADM作用48h后凋亡率为2．69a：0，05％；Tor(2．5pmo／L、Tet0Ltmo／L)、Tor(2．5rtmo／L)联合Tet(1№o／L1，与ADM共同作用48h后，东南人学硕士学位论文凋亡率分别为12．10-4=1．10％、19．10士1．20％和61．10％士O．80％；(3)RT-PCR检测细胞mdrlmRNA的表达：QK562细胞mdrlmRNA表达为阴性，K562／A02细胞mdrlmRNA表达为阳性；

5、②K562／A02细胞的空白对照组mdrl／[3一actin为1．398土0．03l，Tet组为0．923-4-0．044，Tor为1．112士0．029，两药联合组为0．389土0．062，Tet及Tor单独作用后K562／A02细胞mdrlmRNA下调微弱，联合用药下调效果明显(尸

6、Tor处理过的K562／A02细胞P．gP蛋白的荧光强度下调，两药联合下调更明显，具有协同作用(P<0．05)；(5)FCM检测细胞内ADM浓度：@K562／A02细胞内ADM浓度为K562细胞的13．40％；②K562／A02经Tet、Tor及两药联合作用48h，细胞内ADM浓度分别为K562细胞的35．36％、21．82％和48．62％。Tet处理组及Tet联合Tor处理组，细胞内ADM浓度明显增加，与K562／A02对照组间有显著性差异(P<0．05)。(6)RT-PCR检测细胞SurvivinmRNA的表达：QK562细胞、K

7、562／A02细胞SurvivinmRNA表达均为阳性，但K562／A02细胞的表达水平有所上调；②K562／A02细胞的空白对照组、Tet组、Tor组、两药联合组的SurvivinJl3．actin分别为1．414士0．025、0．982士0．041、0．886-2：0．024和0．459：t0．029，Tet及Tor单独作用后K562／A02SurvivinmRNA下调微弱，联合用药下调效果明显(尸

8、死K562／A02细胞；(2)有效逆转浓度的Tet及Tot均可下调K562／A02细胞mdrlmRNA、SurvivinmRNA的表达：(3)有效逆转浓度的Tet及托瑞米芬均可逆转耐药，且联合作用效果增强。关键阋汉防己甲