汉防己甲素对白血病耐药细胞株k562-a02核因

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1、汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562/A02核因【摘要】通过研究汉防己甲素（tetrandrine,Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02核因子κB（nuclearfactorkappaB，NFκB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1μmol/LTet作用K562和K562/A02细胞6h和12h后，细胞NFκB核转位水平和胞核NFκB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NFκB核转位水平及胞核NFκB蛋白表达均无明显影响

2、(P>0.05)；K562/A02细胞NFκB核转位水平及胞核NFκB蛋白表达明显高于K562细胞对照组(P<0.01)；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562/A02细胞NFκB蛋白核转位(P<0.05)和胞核NFκB蛋白表达水平（P<0.01)，作用12h较作用6h效果更显著(P<0.05)。结论：1μmol/LTet可能通过抑制NFκB活化逆转K562/A02细胞多药耐药性。【关键词】白血病多药耐药防己甲素核因子κBObjective:Toinvestigatetheeffectsoft

3、etrandrine(Tet)onnuclearfactorkappaB(NFκB)expressioninleukemiacelllineK562andmultidrugresistantK562/A02cellline.Methods:TheactivationsofNFκBinK562andK562/A02cellsandtheeffectsof1μmol/LTetonNFκBexpressioninedbyimmunocytochemistryandDR）时耐受性较好，无明显副作用［35］。核因子κB（nuclearfa

4、ctorkappaB，NFκB）是分布和作用十分广泛的真核细胞转录调控因子，其与肿瘤发生发展、浸润转移以及肿瘤多药耐药有密切关系，可能成为提高肿瘤化疗效果的治疗新靶点［6］。本课题组既往的实验已证实，Tet能有效逆转慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞耐药株K562/A02对化疗药物柔红霉素的耐药性；它逆转耐药可能与下调mdr1基因及P糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp）的表达，改变细胞内钙离子浓度［Ca2＋］i，下调bcr/abl基因等有关［7,8］。为进一步了解该药逆转耐药的作用机制，本实验将检测Tet对NFκB表达

5、的影响，为该药作为耐药逆转剂应用于临床提供理论依据。1材料与方法1.1细胞株及人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562购自中国科学院上海细胞生物学研究所。人慢性粒细胞白血病急性红白血病变阿霉素（adriamycin,ADM）耐药细胞株K562/A02购自中国医学科学院血液病研究所。1.2主要仪器及试剂免疫组化SP检测试剂盒，为北京中山生物技术有限公司产品；蛋白提取试剂盒为ActiveMotif公司产品；蛋白质定量测定试剂盒为Pierce公司产品；asterVDS图像分析仪、ImageMaster2DPlatinum5.0软件为Pha

6、rmacia公司产品。所有操作均按试剂盒说明书提供的方法进行。Tet注射液，30mg/支（2ml）为浙江康恩贝集团金华制药厂产品。1.3细胞培养及实验分组K562细胞用含10%小牛血清的RPMI1640培养液培养，K562/A02细胞在含10％小牛血清、1μmol/LADM的RPMI1640培养液中培养，置于37℃、5%CO2培养箱中，每天换液，2～3d传代一次。实验时取对数生长期细胞，用无血清RPMI1640培养液静置6h后，计数活细胞数，活细胞数90％以上时进行分组及干预，细胞密度按不同实验要求调整，实验重复3次。K562细胞和K56

7、2/A02细胞分别分组，即分为K562细胞对照组、K562细胞Tet6h组、K562细胞Tet12h组和K562/A02细胞对照组、K562/A02细胞Tet6h组、K562/A02细胞Tet12h组。本实验所采用的各药物剂量均系本课题组既往实验通过MTT法计算半数抑制浓度（50%inhibitingconcentration,IC50）所得，其中1μmol/LTet为最佳有效逆转浓度，该浓度无细胞毒作用，用于实验。1.4NFκB核转位免疫细胞化学染色及结果判断操作按试剂盒说明书提供的方法进行，3氨基9乙基咔唑（3amino9

8、ethylcarbazole,AEC）显色，PBS代替一抗作为阴性对照，以细胞核有红色颗粒者为阳性细胞，镜下随机选取5个高倍视野，计数500个细胞，计算胞核染色的阳性细胞占细胞总数的百分比。