雌激素受体配体对二氢睾酮诱导的内皮细胞保护效应的影响及机制探讨

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1、分类号UDC博士学位论文密级雌激素受体配体对二氢睾酮诱导的内皮细胞保护效应的影响及机制探讨TheEffectandmechanismofEstrogenReceptorLigandsonDHT．．InducedEndothelialCellsGrowth作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：翁春艳内科学(心血管)中南大学湘雅三医院杨侃教授答辩委员会主席中南大学2012年9月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过

2、的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：么≥拦日期：趁陛年毕月上日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：趟丞年止月笾日博士学位

3、论文摘要目的：1．研究不同雌激素受体配体和雄激素对内皮细胞增殖效应的影响；2．探讨不同雌激素受体配体对雄激素作用的影响。方法：1．采用人主动脉内皮细胞，分别以不同浓度的仅雌二醇、p雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、染料木黄酮培养细胞48小时，MTS法检测细胞增殖活力；qRT—PCR方法检测cyclinA和VEGFmRNA表达水平，MSD化学发光法检测VEGF分泌水平，比较仅雌二醇和13雌二醇对VEGF、cyclinA基因表达的影响。RT—PCR和Westernblot检测雌激素受体Q和雌激素受体p在mRNA和蛋白水平的表达；激素受体0【激动剂PPT和雌

4、激素受体p激动剂DPN干预人主动脉内皮细胞，比较PPT和DPN对人主动脉内皮细胞增殖的影响。2．用不同浓度的二氢睾酮干预人主动脉内皮细胞，在不同时间点(0h，24h，48h)，用MTS方法检测细胞增殖活力，确定二氢睾酮干预人主动脉内皮细胞的最佳浓度和时间。用不同浓度二氢睾酮(5nM，10nM)干预人主动脉内皮细胞48小时，qRT。PCR、MSD化学发光和Westernblot方法检测雄激素受体、VEGF、cyclinA和cyclinD的mRNA和蛋白表达水平，比较雄激素受体、VEGF、cyclinA、cyclinD基因表达水平的变化。采用siRN

5、A干扰的方法沉默雄激素受体的表达，在二氢睾酮10nM溶液中培养48小时，以非特异性siRNA干扰组为对照，了解二氢睾酮的促人主动脉内皮细胞增殖作用。本研究获得以下项目资助：1．美国国家卫生研究所(NationalInstitutesofHealth，NIH)基金：项目编号ULlRR024996．2．国家国际科技合作计划(InternationalScience&TechnologyCooperationProgramofChina)：项目名称及编号一新型抗肿瘤先导化合物的研制201lDFA30620．3．国家留学基金：留学金[200913012号

6、．T博士学位论文摘要3．分别用不同浓度的0【雌二醇、p雌二醇、乙烯雌酚、染料木黄酮、他莫昔芬、氟维司群、PPT、DPN联合二氢睾酮10nM培养人主动脉内皮细胞48小时，用MTS法检测细胞增殖活性，设单纯二氢睾酮10nM为阳性对照组，了解各种雌激素受体配体对二氢睾酮促人主动脉内皮细胞增殖作用的影响，同时比较雌激素受体仅激动剂、雌激素受体p激动剂对二氢睾酮促人主动脉内皮细胞增殖作用的影响。结果：1．仅雌二醇、p雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、染料木黄酮对人主动脉内皮细胞增殖的影响：0c雌二醇10nM组和100nM组细胞增殖活力显著高于对照组，分别增加24

7、％(P<0．05)和31％(P

8、殖活力较对照组增加，其中PPT1nM细胞增殖活力较对照组增加24％，有显著统计学差异(P<0．05)。ERl3激动剂DPNO．05nM，