雌二醇与二氢睾酮对血管内皮细胞增殖的影响和机制研究

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1、中图分类号B5垒l!垒UDC610博士学位论文学校代码!Q5三三密级公珏雌二醇与二氢睾酮对血管内皮细胞增殖的影响和机制研究ResearchontheeffectandmechanismofDihydrotestosteroneandEstradiolonendothelialcellproliferation作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期伽哆sⅣ文娟临床医学内科学中南大学湘雅三医院杨侃教授答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢

2、的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：兰兰亟日期：巫年三月二蛋学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：蟛年兰出雌二醇与二氢

3、睾酮对血管内皮细胞增殖的影响和机制研究摘要目的：1．研究二氢睾酮对不同来源的内皮细胞增殖和迁移的影响；2．探讨二氢睾酮调控内皮细胞增殖的机制；3．研究不同雌激素对雄激素诱导的内皮细胞增殖效应的影响。方法：1．分别用不同浓度二氢睾酮培养人主动脉内皮细胞和小鼠微血管内皮细胞24小时和48小时，MTS检测细胞增殖活力；分别将不同剂量雄激素受体(AR)siRNA或AR抑制剂Casodex与二氢睾酮10riM联合培养人主动脉内皮细胞48d,时，分析二氢睾酮诱导的人主动脉内皮细胞增殖与雄激素受体的关系。2．分别收集不同时间段LAPC．4和LNCaP细胞条件培养基(TCM)稀释成不同浓度培养小鼠微

4、血管内皮细胞484,时，MTS法检测细胞增殖活力；用不同剂量二氢睾酮预处理LAPC．4和LNCaP细胞，48小时后收集TCM干预内皮细胞，MTS法检测细胞增殖活力；采用VEGFR抑制剂SU5416联合相应TCM培养内皮细胞24d'时或48小时，用MTS方法检测细胞增殖活力；采用MDS法、实时定量PCR法分别检测相应TCM中VEGF．A浓度和细胞VEGFmRNA的表达水平，分析VEGF／VEGF砌恿路在二氢睾酮诱导的小鼠微血管内皮细胞增殖中的作用。3．细胞实验：单用或合用二氢睾酮、17et．雌二醇或17B．雌二醇培养人主动脉内皮细胞48小时，MTS法检测细胞活力；单用或合用二氢睾酮、1

5、7a．雌二醇或1713．雌二醇培养LAPC．4细胞48tJ、时，收集TCM，用MDS法检测TCM中VEGF浓度，并用TCM干预小鼠微血管内皮细胞48，，J'时，MTS法检测细胞活力。动物实验：分别建立LAPC．4和LNCaP细胞异种移植的小鼠模型，将建模成功的小鼠随机分为安慰剂组、17d．雌二醇组和1713．雌二醇组，干预4周后处死小鼠收集移植组织，采用免疫组化法检测血管CD31的表达量，分析雌激素对微血管生成的影响。结果：1．二氢睾酮对不同来源内皮细胞增殖和迁移的影响：二氢睾酮lnM～50nM组人主动脉内皮细胞增殖活力较对照组增加，该增殖效Ⅱ应呈时间和剂量依赖性趋势。二氢睾酮对小鼠

6、微血管内皮细胞增殖无明显影响。二氢睾酮10nM组HAECs迁移数较对照组增加(D0．05)。2．二氢睾酮通过微环境促进小鼠微血管内皮细胞增殖：LAPC．4和LNCaP细胞TCM可时间和浓度依赖性地诱导小鼠微血管内皮细胞增殖；二氢睾酮0．1州到50

7、nM预处理后的TCM(DHT．TCM)较对照组TCM内皮细胞增殖活力明显增加(p<0．05)。二氢睾酮诱导的小鼠微血管内皮细胞增殖与VEGF／VEGFR信号的相关性：收集时间点为24tJx时和48小时的LAPC．4细胞TCM中vEGF浓度分别是12．43ng／ml丰H28ng／ml；但DHT．TCM和对照组TCM相比，各组间VEGF浓度差异无统计学意义(p>0．05)。SU541610uM可完全抑制相应TCM诱导的内皮细胞增殖(p