肿瘤相关抗原OVA66的连续性B细胞表位定位

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1、上海交通大学硕士学位论文肿瘤相关抗原OVA66的连续性B细胞表位定位姓名：刘争春申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：葛海良20090501上海交通大学2006级硕士学位论文自制的两株小鼠抗OVA66单克隆抗体5F4和4G9则分别作用于片段1和片段2。二、OVA66蛋白连续性B细胞抗原表位的预测及筛选应用生物信息学方法，综合单参数（亲水性、可及性、柔韧性、极TM性）预测、二级结构预测、BcePred及EpiShot软件的预测结果，提示OVA66的连续性B细胞表位可能位于392-411，270-289，519

2、-538，461-480，10-29，43-55，212-227，284-301和487-501氨基酸残基的区域内，合成这些候选表位肽段并应用EILSA法，分别以小鼠抗OVA66单抗及多抗、兔抗OVA66多抗及17例OVA66抗体阳性的癌症患者血清作为一抗筛选肽段，以大于空白孔OD值2倍作为阳性，发现小鼠多抗作用于肽段P2（OVA66片段2内）和P5（OVA66片段1内），兔多抗作用于肽段P8（OVA66片段2内），而1例癌症患者作用于肽段P9（OVA66片段3内）。结论：本研究成功构建了重组载体pET28a

3、-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66片段3，表达并纯化了OVA66及其三个片段融合蛋白。获得了2条（P2、P5）小鼠抗OVA66多抗针对的表位肽段，1条（P8）兔多抗针对的表位肽段及1条（P9）癌症患者针对的表位肽段，为进一步探讨OVA66的临床应用价值奠定基础。关键词：OVA66，原核表达，蛋白纯化，连续性B细胞表位，表位预测，上海交通大学2006级硕士学位论文表位定位上海交通大学2006级硕士学位论文CONTINUOUSB-CELLEPITOPEMAPPINGOFT

4、UMOR-ASSOCIATEDANTIGENOVA66ABSTRACTOVA66,anewtumor-associatedantigen,wasobtainedfromahumanovariancancercDNAlibrarybySEREX(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibrary)inourlab.OurpreviousresearchworkdemonstratedthatOVA66wasmainlyexpressedintumorcel

5、ls,tumorandtestistissue,suggestingthatcharacteristicsofOVA66maybesimilartoCTantigens.Theover-expressionofOVA66genecouldacceleratecellproliferationandpromoteinvasionandmetastasisoftumorcellsinvitro.OVA66wasatumorantigenwhichhadbroadimmunogenicitythatcannoton

6、lyinducetheformationT-cellclone，butalsoexcitehumoralimmunereaction，itindicatedthatOVA66hadagoodprospectinclinicaltumordiagnosisandtherapy.Inthisstudywemainlyfocusedontwoaspects:1.ExpressionandpurificationofOVA66anditsthreefragmentsandpreliminaryB-cellepitop

7、emappingofOVA66pET28b-OVA66fusionproteinwasprokaryoticexpressedandpurified，上海交通大学2006级硕士学位论文meanwhile，geneOVA66wasfallintothreefragments，recombinantplasmidspET28a-OVA66-fragment1,pET28a-OVA66-fragment2andpET28a-OVA66-fragment3wereconstructed，these3fragmentf

8、usionproteinswerethenprokaryoticexpressedandpurified.CombinedwithresultsofELISAandWesternblot，wefound17cancerpatientswhoseserumswereanti-OVA66antibodypositiveamongallcancerpatientswedetected，oneof17pat