B细胞交叉递呈DRibbles抗原诱导免疫应答与抗肿瘤作用的分析

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1、万方数据中文摘要自噬(autophagy)是细胞利用溶酶体降解胞浆中受损或废弃的细胞器和大分子物质的过程。自噬对细胞的代谢、能量循环、细胞器更新以及维持细胞内稳态有至关重要的作用。研究表明，细胞自噬与人类疾病，尤其是肿瘤的发生和发展有重要的相关性。本课题组的前期研究发现，抑制蛋白酶体降解途径，同时用雷帕霉素诱导自噬途径，可以摹集大量自噬小体(将其命名为DRibble：DRipsinBlebs，即DRs)，它能作为抗原交叉递呈的物质基础【11。B细胞除介导体液免疫外也是重要的抗原递呈细胞(APC)。然而，静息的B细胞不仅不能激

2、活初始T细胞(Na'fveTcells)，反而会使它失活【2引。即使采用LPS等刺激来活化B细胞并上调其MHCI类、II类分子以及CD80／86等共刺激分子依旧无法有效活化初始T细胞，尤其是B细胞很难交叉递呈抗原激活初始CDS*T细胞【幸1。多年来，人们尝试了很多方法激活B细胞来提高其激活初始CD4+T和CD8+T细胞的抗原递呈能力。通过CD40分子活化B细胞一直是人们研究的重点。研究显示：刺激B细胞的CD40分子，在体外能够活化外周血来源的B细胞、上调其表面MHCI类和II类分子以及CD80／86等共刺激分子，并使B细胞大

3、量增殖【5i。CD40活化的B细胞负载各种抗原后，在体外能诱导抗原特异性的初始CD4+T细胞和CDg+T细胞应答16]。体内研究也表明，活化B细胞可以诱导T细胞应答。此外，Jiang等发现初始B细胞在CpG的预先作用下，能够发挥交叉递呈功能激活CD8+T细胞【71。DRibbles不仅充分利用了肿瘤细胞全部的抗原信息，包括长寿蛋白和短寿蛋白等，而且含有多种DAMP分子。我们的前期实验证实：DRs能以TLR2．MYD88依赖方式活化B细胞，而且活化的B细胞能直接交叉递呈D黜抗原诱导效应T细胞再次应答is]。然而，基于B细胞的D

4、Ribble疫苗诱导T细胞应答及其抗肿瘤效果还有待进一步研究。目的：1、研究B／DRibbles加强免疫能否增强DRibbles疫苗诱导的免疫应答及其抗肿瘤作用。2、研究联合cpG和抗CD40抗体预处理的B／DRibbles疫苗能否进一步增强B／DRibbles疫苗诱导的免疫应答和抗肿瘤作用。方法：1．在OT-1细胞过继小鼠模型上，观察B／DRibbles(OⅥn加强免疫能否增强DRibbles(OVA+)疫苗诱导的免疫应答及其抗肿瘤作用：T万方数据东南大学硕士学位论文1．1建立C57BL／6小鼠的EG7皮下移植瘤模型，用D

5、Ribbles(OVA+)初始免疫，同时过继OT．1细胞，随后以B／DRibbles(OVA+)疫苗进行两次加强免疫，观察肿瘤生长情况和小鼠生存期限：1．2首次治疗后第lO天处死部分小鼠，收集脾脏和淋巴结细胞，流式检测OT．1细胞的比率；1．3DRibbles体外刺激淋巴细胞72小时后ELISA法检测上清中IFN吖水平。2．在野生型小鼠肿瘤模型上，观察B／DRibbles加强免疫能否增强DRibbles疫苗诱导的免疫应答及其抗肿瘤作用：2．1建立C57BL／6小鼠EG7肿瘤模型，用DRibbles初始免疫，但不过继OT．1细

6、胞，随后以B／D慰bbles疫苗两次加强免疫，观察肿瘤生长情况和小鼠生存期限；2．2首次治疗后第10天处死部分小鼠，观察脾脏形态并收集脾脏和淋巴结细胞：DRibbles体外再刺激72小时后，ELISA法检测上清中IFN-'t水平：2．3首次治疗后第15天采集小鼠内眦静脉血，检测血清中抗EG7抗体水平；2．4首次免疫后第40天取小鼠肿瘤组织，检测其中浸润CD4+T和CDg+T细胞比例。3．观察联合CpG和抗CD40抗体能否优化B／DRibbles疫苗诱导的抗肿瘤作用3．1建立C57BL／6小鼠的EG7皮下移植瘤模型，用DRib

7、bles初始免疫，随后以B／DRibbles疫苗或联合CpG和抗CD40抗体优化的B／DRibbles疫苗进行两次加强免疫，观察肿瘤生长情况和小鼠生存期限；3．2首次治疗后第10天处死部分小鼠，收集脾脏和淋巴结细胞，体外培养并加抗原再刺激，72小时后收集培养上清，ELISA法检测上清中口卧H水平。结果：1．在OT-1细胞过继小鼠模型上，观察B／DRibbles(OVA+)力ll强免疫能否增强DRibbles(OVA3疫苗诱导的免疫应答及其抗肿瘤作用：1．1与PBS组相比，DRs(OVA+)单独免疫组小鼠肿瘤生长明显减慢，平均

8、生存时间明显延长(28天vs53天)；两次输注未负载DRs(OVA+)的B细胞并未减慢肿瘤生长及延长平均生存时间(53天vS56天)；与未负载DRs(OVA+)的B细胞组相比，两次输注负载DRs(OVA+)的B细胞能明显减慢肿瘤生长，显著延长平均生存时f司(56天vs>84天)，并100％