固相萃取高效液相色谱法测定烟草样品中主要的植物多酚

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1、第#’卷第+期色谱ZI@P#’NIP+!""#年##月5>SNT/TU8V6N9?8G5>68D9W8X692>YNIOP!""#固相萃取!高效液相色谱法测定烟草样品中主要的植物多酚王岚#，方瑞斌!，李忠#，蒋次清#，杨光宇#（#,云南烟草科学研究院烟草化学室，云南昆明+-"#"+；!,云南大学化学系，云南昆明+-""’#）摘要：建立了先用体积分数为)".的甲醇水溶液回流提取烟草样品中的植物多酚，再采用/01$234$5固相微萃取#)小柱预分离脱脂的前处理方法，并选择了合适的分析烟草样品中植物多酚的高效液相色谱条件。采用5柱

2、，甲醇#)$磷酸二氢钾缓冲液为流动相进行梯度洗脱，烟草中主要的植物多酚均达到基线分离。提取各组分在其最大波长下的色谱图，根据其峰面积定量，并用紫外光谱图对烟草中主要的植物多酚进行辅助定性。在该方法中，多酚的标准回收率为’%.!#"-.，6/7为#,!).!#,%’.。该方法可用于烟草样品中的植物多酚的测定。关键词：高效液相色谱；固相萃取；植物多酚；烟草中图分类号：8+-)文献标识码：9文章编号：#"""$)(#*（!""#）"+$"-+%$"*FFAPLPQ#-"FF），:3;0<=/01$234$5#)固相微萃"前言取小柱

3、；流动相为甲醇（9）与","-FI@·?R#磷酸二植物多酚是烟草中的一类重要物质，其含量对氢钾缓冲液（&）的混合溶液。线性梯度程序为：烟草品质有重要影响，因而研究烟草及其制品中的#-FAB-FAB#".9!)".9（-FAB）!#".9。9的体积植物多酚具有重要意义［#，!］。烟草多酚的测定方法分数恒定在#".平衡#"FAB后自动进下一个样，流主要有分光光度法、气相色谱法和液相色谱法速为",-F?·FABR#。根据标准样品在!""BF!等［*!+］。光度法准确性差且只能近似测定其总量，%""BF波长扫描光谱图，确定绿原酸的最

4、大检测波气相色谱法需要进行复杂的衍生化；传统的液相色长为*!+,#BF，芸香苷的最大检测波长为*-%,)谱法样品前处理需用有机溶剂进行脱脂处理，操作BF，咖啡酸的最大检测波长为*!*,(BF，莨菪葶的较麻烦。因此我们建立了用:3;0<=/01$234$5固#)最大检测波长为*%%,"BF，莨菪宁的最大检测波长相微萃取小柱预分离脱脂、高效液相色谱（>2?5）为*+-,!BF。进样体积为#"。#?分离测定烟草中主要的植物多酚的方法，并用紫外烟草样品及标样在上述色谱条件下检测波长为光谱图对主要多酚作了辅助定性，取得满意结果。*%-

5、BF的色谱图见图#。#实验部分#$%样品处理将烟样品粉碎，过)"目筛。称取约",!"K，加#$"主要仪器和试剂入%-F?体积分数为)".的甲醇水溶液，加热回流9@@A3BC0高效液相色谱$质谱联用仪（美国%"FAB，冷却，过滤并定容到-"F?。取-F?上述:3;0<=公司），包括!+’"分离系统（四元泵、柱温箱液体，以#"F?·FABR#的流速通过预处理好的/01$及自动进样器），’’+紫外二极管阵列检测器，DA@$234$5#)固相微萃取小柱，弃去最初的*F?，收集后@0BBAEF*!色谱管理软件。面的!F?用",%-针头

6、过滤器过滤，用于>2?5#F甲醇为>2?5专用试剂（G@E43公司）；水为石分析。英亚沸蒸馏水，经DA@@A$H-"（美国DA@@A1I<0公司）超纯水仪处理，电阻率不小于#)"4"·F；磷酸二氢钾%结果与讨论为>2?5专用试剂（G@E43公司）；绿原酸（CJ@I

7、谱图与标样的色谱保留时司，含量均大于’’.）。间及光谱图对照确认；图#$3中色谱峰#和*与绿#$#色谱条件原酸有相同的光谱图，峰)与芸香苷具有相似的紫色谱柱：:3;0<=NIO3$234$5#)液相色谱柱（*,’外光谱图，与文献［-］所报道的出峰顺序对照可确认收稿日期：!""#$"%$"!基金项目：云南省烟草公司重点资助项目（!"""&!"#）作者简介：王岚（#’(!$），女，助理工程师，电话：（")(#）)*#+)#!。通讯联系人：杨光宇（#’(*$），男，助理工程师。第<期王岚等：固相萃取0高效液相色谱法测定烟草样品中主

8、要的植物多酚·/AD甲醇提取液过柱，则弱极性脂类物质保留在小柱上，而多酚类物质在该流动相条件下不会在小柱上保留，因此可达到简便快速纯化多酚样品的目的。7’7回归方程、相关系数及检测限配制质量浓度分别为-AA?9·CK-，5A?9·CK-，:BA?9·CK-，AB>?