小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究

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1、泸州医学院硕士学位论文小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究姓名：刘秋均申请学位级别：硕士专业：生理学指导教师：李洪20070401缩写HCC英文全称英汉缩略词对照表hepatomacarcinomacellIPGimmobilizedpHgradient2-DEtwo—dimensionalelectrophoresisMSmassspectrometerIEFisoelectricfocusinggelelectrophoresisESIelectrosprayionizationGPC4glypican-4

2、membraneprotein中文全称肝癌细胞固相pH梯度介质双向电泳质谱分析等电聚焦电泳电喷雾离子化磷脂酰肌醇聚糖蛋白．4膜蛋白质PAP2G4proliferation．associatedprotein2G4增殖相关蛋白2G4s'ynapticvesiclemembraneprotein突触囊泡膜蛋白Ⅵ心1VAT-1homologprmemIEFcellproteinIIXL．systemmembraneproteomics同系物一向电泳仪二向电泳仪膜蛋白组学matrix．assistedlaserdesorpt

3、ion基质辅助的激光电离hepmocyte(1ivercell)33肝细胞泸州医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：飘杈咱辩醐：1"眦棚泸州医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解泸州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：泸州医学院有权保留并向有关部门或机构送

4、交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权泸州医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即：泸州医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。导师签名：二和导师签名：∥y占签字日期：Ⅵ‘2年堂月弓口日小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究摘要目的：运用蛋白质组和生物信息学研究技术，结合生物质谱技术，对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的疏水性蛋白质组与水溶

5、性蛋白质组进行比较研究，分析鉴定其差异表达的蛋白质，确定疏水性蛋白质在小鼠肝癌细胞H22中的表达变化，为进一步探索疏水性蛋白质(包括膜蛋白)在肿瘤细胞发生发展及侵袭转移过程中的作用和地位奠定基础。方法：小鼠肝癌细胞H22按常规方法进行培养，正常小鼠肝细胞以组织块贴壁法培养作为对照组实验材料。小鼠肝癌细胞1-122培养至指数生长期后，与对照组肝细胞分别以两种不同的方法进行细胞裂解。第一种为常规的细胞裂解法(裂解液由8mol／L尿素，1％TBP，4％CHAPS，O．2％Bio-Lyte组成)，获得肝癌细胞和肝细胞的水溶性

6、蛋白质。第二种为改良的分步提取裂解法，即以冻融法结合强增溶裂解液(由7mol／L尿素，2mol／L硫脲，50mmol／LDTT,4％CHAPS，O．2％Bio．Lyre组成)裂解细胞并分步提取，获得肝癌细胞及肝细胞的疏水性蛋白质。Bradford法测定蛋白质含量，双向电泳分离蛋白质。第一向采用pH4．7的固相pH梯度(IPG)等电聚焦，第二向采用浓度为10％的十二烷基磺酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳。银染并经凝胶成像系统采集获得双向电泳图谱，根据IPG胶条的pI线性梯度和标准分子量Marker，确定蛋白质斑点的pI和MW，

7、用PDQuest2D分析软件对实验组和对照组的蛋白质电泳图谱进行差异分析，初步筛选出13个具有差异表达的蛋白质。切取蛋白质斑点，应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI．TOF．MS)进行检测，获得各蛋白质的肽指纹图谱，结合2-DE图谱中各蛋白质点的pI和MW值，利用Aldente软件进行匹配检索Swiss．Prot数据库，鉴定小鼠肝癌细胞株H22差异表达的疏水性蛋白质。结果：①应用改良的分步提取裂解法所获得的小鼠肝癌细胞H22及正常小鼠肝细胞蛋白质组双向电泳图谱与常规裂解法所获得的双向电泳图谱相比较存在明

8、显差异。②利用质谱技术和生物信息学技术，鉴定了13个与小鼠肝癌细胞H22相关的疏水性蛋白质，其中5个为膜蛋白，其余7个为胞浆或胞核难溶性蛋白。这些蛋白质的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等。结论：①改良的分步提取裂解法能够从小鼠肝细胞及肝癌细胞中成功分离提取疏水性蛋白质。②应用比较蛋白质组学的研究方法确定了13个与小鼠肝癌