骨髓间充质干细胞旁分泌途径对阿霉素损伤心肌细胞凋亡的影响

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1、江苏大学硕士学位论文摘要目的：通过骨髓间充质干细胞(MSCs)与阿霉素(ADR)损伤心肌细胞共培养体系的建立，模拟MSCs移植的心肌病微环境，观察MSCs对ADR损伤心肌细胞的凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法：(1)贴壁法分离、培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)；酶消化法及差速贴壁法分离、纯化、培养SD乳鼠心肌细胞；原代培养72小时的心肌细胞，终浓度为lmg／L的阿霉素(ADR)作用4小时后建立ADR损伤心肌细胞模型。(2)原代培养72小时的心肌细胞分为三组：正常心肌细胞对照宝tt(A组

2、)，ADR损伤心肌细胞组(B组)，ADR损伤心肌细胞与MSCs共培养组(C组)。(3)ELISA检测各组心肌细胞条件培养基中胰岛素样生长因子(IGF．1)和肝细胞生长因子(HGF)的浓度。(4)Hoechst33258荧光染色、TUNEL法及AnnexinV—FITC流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡率。(5)分光光度法检测各组心肌细胞caspase-9和caspase一3活性。(6)Westerblot检测各组心肌细胞Bax和Bcl．2蛋白表达水平。结果：(1)lmg／L浓度的ADR作用4小时后，

3、和正常心肌细胞相比，ADR损伤心肌细胞存活率下降[(74．77+10．53)％VS100％，尸<0．05】，凋亡率增加【Hoechst33258荧光染色：(9．86+0．75)％VS(6．71+1．18)％，P<0。051，成功建立心肌细胞毒性损伤模型。(2)ELISA检测结果显示：B组IGF．1浓度高于A组[(507．43+135．98)pg／mlVS(313．53+124．39)pg／ml，尸<0．05】，HGF的浓度亦显著高于A组江苏．垄芏堡主兰堡垒查．——一———————————————

4、——————————————一[(128．49i17．25)pg／mlVS(56．62+15．01)pg／ml，P

5、数(％)：13．92+1．69VS5．92+1．02，P<0．05；TUNEL细胞凋亡指数(％)：16．42+2．01VS6．58+0．80，P<0．05；AnnexinV—FITC早期凋亡率(％、)：41．79+2．96VS23．94+1．03，P<0．05；AnnexinV—FITC晚期凋亡率(％)：17．20士1．61vs7．64+0．56，P<0．05]；C组和B组相比，心肌细胞凋亡率下[绛[Hoechst33258荧光染色细胞凋亡指数(％)：10．08+1．02vs13．92+1．69

6、，P<0．05：TUNEL细胞凋亡指数(％)：l1．25+1．41vs16．42+2．01，P<0．05；AnnexinV-FITC早期凋亡率(％)：32．99+1．47vs41．79+2．96，P<0．05；AnnexinV—FITC晚期凋亡率(％)：l1．15+1．21vs17．20土1．61，P<0．05]。(4)B组和A组相比，caspase。9活性显著增加(O．427+0．018VS0．287+0．012，P<0．05)，caspase_3活性亦显著增加(O．356+0．032VS0．

7、231+0．023，P<0．05)；和B组相比，C组caspase．9活性显著下降(O．331+0．011VS0．427+0．018，P<0-05)，caspase一3活性亦显著下降(O．302+0．020VS0．356+0。032，P<0·05)。(51Wrestemblot检测结果显示：B组Bax蛋白表达水平高于A组fO．70+0．03vs0．27+0．02，P<0．05)，Bcl．2蛋白表达水平低于A组(O．31士0．02vs0．75+0．01，P<0．05)；和B组相比，C组Bax蛋白表

8、达水平下降(O．42+0．02VS0．70+0．03，P<0．05)，而Bcl一2蛋白表达水平江苏大学硕士学位论文增DH(O．48士0．01VS0．31+0．02，P<0．05)。结论：(1)lmg／L浓度的ADR作用4小时可建立可靠的心肌细胞毒性损伤模型。(2)MSCs通过旁分泌途径可以抑制ADR诱导的心肌细胞凋亡。(3)骨髓MSCs的上述作用可能和MSCs在损伤环境下分泌的IGF一1及HGF增多有关。关键词：骨髓间充质干细胞；心肌细胞；旁分泌；阿霉素；凋亡江苏大学硕士学位论文ABSTRACT