mir-29a对骨髓间充质干细胞增殖与凋亡的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheRoleofmiR-29ainbonemarrowmesenchymaistemcellsproliferationandapoptosisByJunLingLiuSupervisor：Prof．WenhaiYanPathologyandPathophysiologyCollegeofBasicMedicineMay2012原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，

2、本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关

3、的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日摘要miR．29a对骨髓间充质千细胞增殖与凋亡的影响硕士研究生：刘俊玲导师：鄢文海教授郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450001摘要微小RNAs(miRNAs)是一类大小约21～23个碱基的单链小分子RNA，在进化中高度保守，其表达既具有时空特异性，也具有组织和细胞特异性。miRNAs通过与mRNA的3’端UTR序列互补而抑制其翻译，从而广泛地参与细胞生物学过程，包括发育、细胞增殖、分化、凋亡及代谢等。本实验室通过miRNA芯片技术发现骨髓间充

4、质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)向神经细胞分化后，miRNAs的表达谱发生明显改变，其中miR．29a的表达量较分化前增高最为明显。已有研究表明，miR．29a在胚胎期组织中不表达或低表达，但在生物体成熟组织细胞中广泛表达，也有研究发现miR．29a在肉瘤、胃癌、白血病等癌症中表达降低，提示miR029a可抑制肿瘤细胞的增殖，促进凋亡。因此，我们推测miR．29a可能影响BMSCs的增殖分化过程并参与BMSCs的增殖分化调控。间充质干细胞是来源于中胚层的成体干细胞，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓

5、组织中含量最为丰富。BMSCs具有高度增殖、自我更新和多向分化潜能。BMSCs在特定的诱导条件下能分化为特定的成体细胞，同时丧失增殖能力和多向分化潜能，被认为是临床细胞替代治疗的理想细胞来源。但是，对BMSCs增殖特性的维持和分化调控机制尚不清楚。本实验为了研究miR．29a对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响，用慢病毒介导miR．29a前体表达载体感染骨髓间充质干细胞，采用流式细胞仪测定miR．29a过表达和抑制时骨髓间充质干细胞的增殖与凋亡的变化，生物信息学分摘要析miR-29a对骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡的调控靶位点和机制，进一步探讨miR一29a对骨

6、髓间充质干细胞的增殖和凋亡的影响。目的通过调节miR．29a在BMSCs中的表达状态，观察miR一29a过表达和抑制时对BMSCs增殖和凋亡的影响，并分析其调控靶基因及作用机制。方法1．慢病毒的包装和滴度测定。293T细胞复苏和扩增，分别用脂质体转染miR．29a前体表达病毒载体(eGFP)、miR．29a前体表达病毒对照载体(空白对照，cGFP)、miR．29a抑制剂病毒载体(mChca'ry)、miR．29a抑制剂病毒对照载体与包装载体(空白对照，mChcrry)，48h收获病毒上清，分别为Lvx．miR．29a、Lvx．miR．29a-control、

7、Lvx-miR．29a(．)、Lvx．miR．29a(．)．control，分别用病毒上清液感染293T细胞，流式细胞仪分别检测绿色或红色荧光细胞阳性率并计算病毒滴度。2．慢病毒感染BMSCs。体外分离培养大鼠BMSCs，传代至第四代BMSCs用于病毒感染，分为Lvx．miR．29a组、Lvx．miR-29a对照组、Lvx．miR．29a(．)组和Lvx-miR．29a(．)．control对照组，分别加入Lvx-miR．29a、Lvx．miR．29a-control、Lvx．miR．29“．)、Lvx．miR-29a(．)-control(MOI=10)来

8、感染BMSCs，感染6d后荧光倒置显微镜下观察绿色或