载脂蛋白A5调节甘油三酯代谢机制及其临床意义

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1、中南大学博士学位论文中文摘要背景：血浆甘油三酯(TG)升高是冠心病的独立危险因素，引起高甘油三酯血症(HTG)常见原因包括高果糖饮食、急性期反应(APR)、代谢综合征(MS)等。降低TG可有效防止冠心病，目前可降低TG的降脂药物主要有：他汀类、贝特类和血脂康等。载脂蛋白A5(ApoA5)是新发现的载脂蛋白超家族成员，大量研究均证实，ApoA5可显著降低血浆TG。过氧化物酶体增殖物激活受体．a(PPARa)和肝X受体．Q(LXRa)是调节ApoA5表达的两个关键核受体，其中，前者上调ApoA5表达，而后者下调ApoA5表达。然而，目前尚不清楚高果糖饮食

2、、急性期反应以及代谢综合征诱导的HTG是否与ApoA5有关；也不知他汀类、贝特类或血脂康降低TG是否通过ApoA5而起作用。目的：明确高果糖饮食、急性期反应以及代谢综合征诱导的HTG是否与ApoA5有关，明确非诺贝特、阿托伐他汀和血脂康降TG作用是否与调节ApoA5有关，并探讨核受体PPARa和LXRa对ApoA5表达的调节作用。方法：一．果糖诱导性高甘油三血症的动物和体外实验40只健康雄性Sprague．Dawley大鼠，随机分为五组(n=8／组)：(1)对照组：正常普通饮食喂养；(2)HTG组：10％果糖水喂养2周建立高HTG大鼠模型，并继续喂养

3、4周；(3)贝特组：HTG大鼠建模后，加予非诺贝特(100mg／kg／天)干预4周；(4)他汀组：HTG大鼠建模后，加予阿托伐他汀(10mg／kg／天)干预4周；(5)联合组：中南大学博士学位论文中文摘要HTG大鼠建模后，加予非诺贝特(100mg／kg／天)和阿托伐他汀(10mg／kg／天)干预4周。分别在0周、2周及6周测定体重和空腹血脂。6周后取动物肝脏组织标本，采用免疫组化、逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)及免疫印迹(WB)测定肝脏ApoA5的基因和蛋白表达，同时采用RT-PCR和WB测定肝脏PPARa和LXRQt的基因和蛋白表达。以Hep

4、G2细胞为模型，观察果糖、非诺贝特和阿托伐他汀干预后，细胞TG浓度变化，ApoA5、PPARot和LXRQt表达的改变，并通过PPARa或LXRa的激动剂或抑制剂干预，揭示三者调控ApoA5表达的机制。二．急性期反应性高甘油三酯血症的l隘床、动物及体外实验(--)ACS临床试验入选228例ACS患者和232名健康者作为研究对象，抽血分离血浆，采用酶联免疫吸附检测(ELISA)测定ApoA5血浆浓度，同时测定血浆C．反应蛋白和血脂水平。(--)急性炎症动物和体外实验32只6周龄健康雌性C57BL／6鼠，随机分为4组(n=8／组)：(1)对照组，普通饮食

5、喂养；(2)炎症组，普通饮食喂养4周后，腹腔注射100pg脂多糖(LPS)以建立急性炎症模型；(3)他汀组：阿托伐他汀(10mg／kg／天)干预4周后，腹腔注射LPS；(4)贝特组，非诺贝特(100mg／kg／天)干预4周后，腹腔注射LPS。分别在实验第0周、第4周注射LPS前、以及注射LPS后测定空腹血脂和肿瘤坏死因子．0【(n师O【)血浆水平。注射LPS后取动物肝脏组织标本，采用RT-PCR和WB测定肝脏ApoA5和PPARa的基因和蛋白表达。体外观察人重组TNFOL对HepG2细胞TG及ApoA5和PPARa表Ⅱ中南人学博士学位论文中文摘要达的

6、影响，同时观察阿托伐他汀和非诺贝特对TNFa刺激下肝细胞ApoA5表达的影响及其机制。三．血脂康降低冠心病患者甘油三酯的机制研究(一)血脂康降脂临床试验入选60例稳定性冠心病患者，随机分为两组，即血脂康组和对照组，分别接受血脂康(600mg／次，一天两次)和安慰剂治疗，疗程共6周。实验前和实验第6周，采用ELISA测定血浆ApoA5浓度，同时测定空腹血脂水平。(二)动物和细胞实验32只健康雄性Sprague-Dawley大鼠，随机分为四组(n=8／组)：(1)对照组：正常普通饮食喂养；(2)高甘油三酯血脂(HTG)组：10％果糖水喂养2周建立HTG大

7、鼠模型，并继续喂养4周；(3)血脂康低剂量(L．XZK)组，10％果糖水喂养2周建立HTG大鼠模型后，加予血脂康20mg／kg／天进行药物干预，干预4周；(4)血脂康高剂量(H．XZK)组，建立HTG大鼠模型后，加予血脂康40mg／kg／天进行药物干预，干预4周。分别在实验前(O周)、实验后2周及6周测定空腹血脂水平。分别采用RT-PCR和WB测定肝脏ApoA5、PPARa和LXRa的基因和蛋白表达。体外观察血脂康干预对HepG2细胞TG、以及ApoA5、PPARa和LXRa表达的影响及其机制。四．代谢综合征I临床、动物及体外实验(一)代谢综合征临床

8、试验入选340例代谢综合征(MS)患者和342名健康者作为研究对象，采用ELISA测定ApoA5血浆浓度，同