百合肌动蛋白基因的克隆与表达分析

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1、园艺学报2013，40（7）：1318–1326http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com百合肌动蛋白基因lilyActin的克隆与表达分析*梁云，袁素霞，冯慧颖，徐雷锋，袁迎迎，刘春，明军（中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081）摘要：为了在百合功能基因表达研究中选择一个理想内参基因，依据岷江百合cDNA文库所获得的百合肌动蛋白（Actin）基因的EST序列，采用RACE技术进行该基因cDNA全长克隆，并利用实时荧光定量PCR分析其在不同组织中的表达模式，获得百合肌动蛋白基因

2、cDNA全长序列（GenBank登录号：JX826390），命名为lilyActin。该基因cDNA全长1367bp，其中，5′非编码区91bp，3′非编码区233bp，开放读码框1134bp，编码377个氨基酸。序列比对发现，该基因与其它15种植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性均在80%以上，氨基酸序列的相似性达98%。进化分析显示，百合肌动蛋白与郁金香肌动蛋白的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果显示，该基因在百合的花蕾、叶片和鳞片组织中恒定表达，表明相对于其他物种的内参基因，lilyActin更适宜作为百合属植物的内参基因。关键词：百合；Actin基因；基因克隆；表达分析；内参基

3、因中图分类号：S682.2文献标志码：A文章编号：0513-353X（2013）07-1318-09CloningandExpressionAnalysisofActinGene（lilyActin）fromLilyLIANGYun，YUANSu-xia，FENGHui-ying，XULei-feng，YUANYing-ying，LIUChun，andMING*Jun（InstituteofVegetablesandFlowers，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100081，China）Abstract：Inthisstud

4、y，theobjectiveistoprovideareferencegeneforgeneexpressionstudiesofLilium.BasedontheactingeneESTsequenceofthecDNAlibraryofLiliumregaleWilson，afull-lengthcDNAsequencewasclonedfromLiliumregaleWilsonthroughrapidamplificationofcDNAends（RACE）methodandthegeneexpressioncharacterswereanalyzedbytherealti

5、mePCR.Thefull-lengthcDNAsequence（GenBank：JX826390）designatedaslilyActinfromLiliumregaleWilsonwas1367bpinlength，containsa1134bpopenreadingframe（ORF）encodinga377aminoacidproteins，with91bpinthe5′UTRand233bpinthe3′UTR.Homologousalignmentshowsthatitsharesover80%nucleotidesequencesimilarityandover98

6、%aminoacidsequencesimilaritywithactinsinotherplants.ThephylogenetictreereconstructedonthebaseofaminoacidsequencessuggeststhattherelationshipofactinbetweenLiliumregaleandTulipagesnerianaisthemostintimate.RealtimePCRanalysisrevealedthatlilyActinwasconstantlyexpressedinvariousorgansofLiliumregale

7、Wilsonsuchasflowers，leaves，bulbs.Theresults收稿日期：2013–02–28；修回日期：2013–05–23基金项目：国家自然科学基金项目（31272205）；国家科技支撑计划项目（2012BAD01B07）；国家社会公益研究专项项目（2005DIB3J022）；国家‘863’计划项目（2011AA100208）；国家公益性行业（农业）科研专项项目（200903008-06，200903020）；北京市花卉重点项目（YLHH20