明胶抗氧化多肽制备的酶法筛选和响应面优化

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1、粮油食品科技第21卷2013年第3期生物工程明胶抗氧化多肽制备的酶法筛选和响应面优化1，22张小强，董文宾(1．咸阳师范学院，陕西咸阳712000;2．陕西科技大学化学与化工学院，陕西西安710021)－摘要:通过对六种酶水解明胶产物水解度(DA)和清除O2·功效的比较，筛选中性蛋白酶为水解用酶。进一步在单因素实验的基础上，通过响应面实验优化得到最佳酶解条件为温度43．65℃，pH值6．25，时间3．29h，酶含量3%(W/W)。在此条件下水解明胶，对酶解产物进行体外超氧阴离子清除活性分析，理论清除率为72．01%，实验值为71．15%。关键词:猪皮明

2、胶;水解度;中性蛋白酶;响应面分析;超氧阴离子自由基中图分类号:TS201．2文献标识码:A文章编号:1007－7561(2013)03－0095－04Enzymaticpreparationofgelatinantioxidantpeptideandoptimizationbyresponsesurfacemethod12ZHANGXiao－qiang，DONGWen－bin(1．XianyangNormalUniversity，XianyangShanxi712000;2．CollegeofChemistryandChemicalEngineeri

3、ng，ShaanxiUniversityofScience＆Technology，Xi'anShanxi710021)－Abstract:DAandO2radicalscavengingrateof6kindsofgelatinenzymatichydrolysatewerecomparedandneutralproteasewaschosentohydrolyzepigskingelatin．Thehydrolysisconditionswereoptimizedbyresponsesurfacemethodologyonthebasisofsing

4、lefactorexperiments，whichwaspH6．25，alcalasecon-－tent3%(W/W)at43．65℃for3．29h．Underthecondition，theO2·scavengingrateofthehydrolyzatewasupto72．01%，andtheexperimentalresultwas71．15%．Keywords:pigskingelatin;degreeofhydrolysis;neutralprotease;responsesurfacemethodology;superox-ideanio

5、nfreeradical－O2·是生物活性最高的氧中心自由基之一，是用其理化性质改善食品质构，很少被用作补充蛋白生物体系中自由基产生的根源，本身性质不太活泼，质营养的原料，以猪皮明胶为来源制备食用抗氧化但产生时间早，寿命长，危害大，可以发生歧化反应、肽的研究尚少见报道。－单电子还原和氧化反应等。过量的O2·还会引起1材料与方法生物大分子过氧化等损伤，从而对生物膜等许多结1．1材料与试剂构造成损害。所以，考察物质清除超氧阴离子的能食品级明胶:山东淄博宝恩生物科技有限公力可作为体内抗氧化性能的重要指标之一。目前，司馈赠;胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性

6、［1－3］已有应用食品源蛋白(如酪蛋白、大豆蛋白、花蛋白酶、中性蛋白酶:Wolsen;木瓜蛋白酶:北京生蛋白、玉米蛋白、鱼骨胶原蛋白等)制备抗氧化活奥博星生物科技有限公司;其余试剂均为国产分性肽的相关研究报道，许多实验证实水解度(DA)和析纯。抗氧化活性存在一定的关联。但是，猪皮明胶由于1．2仪器在体内条件下难消化、必须氨基酸组成有缺陷、蛋白FA1004电子分析天平:上海精密科学仪器;质生物价很低、直接食用口感不好，在食品中主要利JB－1型磁力搅拌器;756PC紫外可见分光光度计:收稿日期:2012－10－10上海雷磁新泾仪器公司;HHS21－6恒温水

7、浴锅:北基金项目:咸阳师范学院科研基金重点项目(12XSYK083)作者简介:张小强，1970年出生，男，陕西咸阳人，博士生．京长安科学仪器厂;SHA－B水浴恒温振荡器:北京瑝瑥生物工程粮油食品科技第21卷2013年第3期东南仪城实验室设备有限公司;ROTINA35台式离2%、3%、4%、5%、6%)，酶解时间(1、2、3、4、5、心机:德国Hettich;LGJ－10冷冻干燥机:北京四环6h)，酶解温度(30、35、40、45、50、55℃)对该指标科学仪器厂。的影响并确定各自最佳反应条件。每次试验重复31．3试验方法次，结果取平均值。1．3．1明

8、胶活性肽的酶法制备(3)响应面(ResponseSurfaceMethod，RSM)试［4－5