海参多肽的制备工艺优化及其抗氧化测定

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1、福建水产，2009年6月第2期NO．2JOURNALOFFUJIANFISHERⅡJun．26．20o9海参多肽的制备工艺优化及其抗氧化测定苏永昌，刘淑集，吴成业(福建省水产研究所，福建厦门361012)摘要：本文对海参酶解工艺条件进行优化，提取液经超滤和冷冻干燥获得海参多肽，并测定其组成及抗氧化活性。结果显示，中性蛋白酶对海参最佳的酶解工艺为：加酶量1800U／g，酶解温度为55~C，酶解pH值为7．5，酶解时间为3h。经超滤与冷冻干燥后，多肽得率为6．9％，蛋白质含量达94．9％。且在抗氧化方

2、面具有较好的清除羟自由基和超氧自由基能力。关键词：海参；酶解；多肽；抗氧化海参为棘皮动物门(Echinodermata)海参冻并去除内脏后，绞碎备用。纲(Holothurioider)动物的总称。我国有海参AS．1398中性蛋白酶，无锡酶制剂公司(酶约140多种，其中有20多种海参可供食用⋯。活力为1．3×10’U／g)。海参是典型的高蛋白、低脂肪、低胆固醇、富1．1．2主要仪器含矿物质和维生素的优质食品J。近年来，人PB—lOpH计：德国赛多利斯科学仪器有限们发现海参中含有许多具有重要生物学活性

3、的公司；DKB一8A电热恒温水槽：上海精宏实验物质，如海参多肽、多糖、皂苷等。海参含有设备有限公司；大容量离心机：上海安亭科学仪丰富的蛋白质，是制备生物活性多肽的理想原器厂；实验用膜分离装置：上海摩速科学器材有料_3J。海参多肽具有良好的溶解性和稳定性的限公司；scientz一12B普通型冷冻干燥机：宁波特点，易消化吸收，食用安全，而且具有降血新芝生物科技有限公司；SP一75紫外分光光度压、预防心脑血管疾病、抗疲劳、提高免疫计：上海光谱仪器有限公司。力、抗肿瘤、抗氧化、延缓衰老等生物活1．2方法性

4、-4．5J。地瓜参(Acaudinamolpadioide)是海参1．2．1多肽制备工艺流程属动物，主要分布在我国沿海海域，资源丰海参酶解一过滤离心超滤_+浓缩一冷冻富。与高档海参相比，其品质滋味较差，但营干燥一海参小分子多肽养价值上并不低于高档海参，而且价格较低1．2．2酶解条件优化廉，因此地瓜参具有很大的开发潜力J。本单因素实验：取50g海参，用AS．1398中性研究以地瓜参作原料，通过对酶解工艺条件的蛋白酶进行酶解，以水解度为指标，分别对海参优化，制备获得海参多肽，并对其抗氧化能力酶解时间、

5、加酶量、加水量、酶解pH值、酶解进行初步研究。温度五个因素进行优化。正交实验：在单因素实验的基础上，选取了1材料与方法酶解时间、加酶量、酶解pH值、酶解温度进行1．1材料四因素，三水平的正交试验，如表1所示：1．1．1原料与试剂新鲜地瓜参，产自宁德，冰冻保存；原料解资助项目：宁德市科技局农业项目(项目编号：20080041)第2期苏永昌等：海参多肽的制备工艺优化及其抗氧化测定7表1海参酶解工艺因素水平水解度缓慢提高，当加酶量为6000U／g时，水解度上升至14．1％，是加酶量600U／g水解度的1

6、．7倍。加酶量的增大能够提高海参蛋白的酶解效率，15O16．5600从而提高水解度。但考虑到生产成本，加酶量需25527．012o0控制在适宜的范围内。在后续的正交实验中选取36037．518oo600U／g、1200U／g、1800U／g三水平进行实验。1．2．3多肽制备酶解液离心过滤后，除去杂质，上清液经截留分子量10000的中空纤维素膜在0．2Mpa压力一下进行超滤，渗透液即为多肽液。多肽液浓缩一后，进行冷冻干燥，得到固体多肽，粉碎后干燥腠*保存。多肽得率(％)=干燥后固体质量／海参重量(湿

7、重)×1001．2．4测试指标及分析测定方法加酶量(U／g)642O8642O图1加酶量对酶解水解度的影响总蛋白质含量测定：微量凯氏定氮法；2．2．2加水量对水解度的影响氨基态氮的测定：甲醛滴定法；多糖的测定：苯酚硫酸法；取海参50g，调pH值至7．0，加酶量为清除羟自由基测定方法：Fenton体系法。。；1200U／g，酶解温度为55℃，酶解时间2h，加水量分别为50mL、100mL、150mL、200mL、250mL、清除超氧自由基测定方法：邻苯三酚自氧化法¨；300mL进行酶解。结果如图2所

8、示，水解度(DH，％)=水解液中总氨基态氮含量／所加底物的总氮含量引。一2结果与分析一嬖2．1地瓜参基本成分测定*经过测定，地瓜参含水量达87．4％，其粗蛋白占海参参干重的74．6％，并含有少量脂肪和多糖，说明地瓜参是一种高蛋白低脂肪的海产加水量(mL)图2加水量对酶解水解度的影响品(见表2)。表2地瓜参中各种成分占干重的含量加水量增加时，水解度下降，其中加水量50ml(即加水量与原料重1：1)时，水解度最大。可能是加水量增加后，酶浓度被稀释，反而降低了水解度。在水解过程中，加水量