广西杂草双生病毒的分子鉴定

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1、浙江大学博士学位论文广西杂草双生病毒的分子鉴定姓名：黄家风申请学位级别：博士专业：植物病理学指导教师：周雪平20050501浙江大掌博士掌位论文摘要双生病毒是植物病毒中唯一的一类具有孪生颗粒形态的单链环状DNA病毒，已在多种重要经济作物上引起危害。我国已从云南、广西等地的烟草、番茄和番木瓜等作物上相继发现了多种双生病毒，并对其基因组结构及变异进行了深入研究。杂草因其种类多、分布广、具有很强的环境适应性，是双生病毒熏要的原始寄主或中间寄主，因此对双生病毒的传播扩散、重组变异及进化有极其重要的作用。为了弄清杂草上双生病毒的发生与分布，我们从广西地区杂草上采集了双生病毒样品并

2、对病毒进行了分子检测与鉴定。从5种常见杂草上采集了28株表现典型病毒症状的样本，用双生病毒的简并引物P：A和PB进行了PCR检测，将扩增到的约500bp的片段经过克隆和序列测定表明，22个样本为粉虱传双生病毒，序列比较发现这些病毒分离物至少有5种病毒类型。因此从每种病毒类型中选取代表，共对8个分离物的基因组结构进行了研究。对草龙上的病毒分离物G37和G38的基因组进行全序列测定，G37和G38DNA—A全长分别为2758和2745个核营酸(nts)；序列比较表明，G37与台湾胜红蓟黄脉病毒(AYVTV)的相似性最高，为73％：G38与中国胜红蓟黄脉病毒(AYVCNV)的

3、相似性最高，为65％。根据双生病毒分类原则，G37和G38是Begomovirus的两个新种，将G37命名为草龙黄脉病毒(Ludwigiayellowveinvirus，LuYVV)，G38命名为中国草龙黄脉病毒缸udwigiayellowveinChinavirus，LuYVCNV)。用DNAp的特异性引物beta01和beta02进行DINAB分子的PCR检测，发现LuYVV伴随有卫星DNAl3分子，其分子大小为1347nts，与其它病毒的DNA6的相似性较低，仅为32．4．50．2％。对胜红蓟上的分离物G47、G52和G68的基因组进行了测序，G52和G68DNA

4、-A全长分别是2735、2740nts，G47部分DNA．A序列是1743nts；序列比较表明，G47和G68分别与中国番木瓜曲叶病毒(PaLCuCNV)和中国胜红蓟黄脉病毒(AYVCNV)的相似性最高，分别为99％衣198．1％，因此，G47为PaLCuCNV的分离物，G68为AYVCNV的分离物。G52DNA．A与AYVCNV的相似性最高，为85％，因此G52是Begomovirus的一个新种，将G52命名为胜浙江大掌博士学位戗?文红蓟曲叶病毒(Ageratumleafcurlvirus，ALCV)。进一步对ALCV基因组进行分析发现，G52是由AYvcNv、PaL

5、CuCNV及一未知病毒重组产生的。另外，从田间样品中发现了PaLCuCNV和AYVCNV的复合侵染。DNAJ]分子检测表明，胜红蓟上的所有AYVCNV都伴随有卫星DNAl5分子，分子大小为1315—1323nts，序列比较发现，这些卫星分子属于同一种DNAIB分子，并且均与胜红蓟黄脉病毒(AYVV)伴随的DNAl5分子相似性最高，为78．4—80．5％。对于里光上的G46分离物的基因组进行了测序，G46DNA-A全长为2746nts，与胜红蓟曲叶病毒(ALcV)的相似性最高，为72，40／o，因此G46是Begomovirus的一个新种，将其命名为千里光黄花叶病毒(Se

6、necioyellowmosaicvirus，SeYMV)。对其进行进化分析，结果表明SeYMV具有独特的进化过程。对赛葵上的G87分离物的基因组进行了测序，G87DNA-A全长为2745nts，与云南烟草曲叶病毒(TbLCYNV)的相似性最高，为75．7％，因此G87是Begomovirus的一个新种，将其命名为赛葵曲叶病毒(Maluastrumteafcurlvirus，MLCV)。DNAIB分子的检测发现MLCV伴随有缺陷型DNAIB分子，分予大小为895nts，它保留了DNAIB分子完整的SCR和A—rich区。Southern印迹检测表明MLCV同时伴随全长D

7、NAp及其缺陷型分子，DNAIB的缺陷型分子在植物中的积累水平远远高于全长分子。对田麻上的G43分离物的基因组进行了铡序，G43DNA-A全长为2735lits，与中国番木瓜曲叶病毒(PaLCuCNV)的相似性为98．9％，因此G43为PaLCuCNV的分离物，从而证实了田麻是PaLCuCNV的中间寄主。关键词：双生病毒；Begomovirus；杂草；DNA—A；DNAl3；基因组；重组浙江大攀博士学位论文AbstractGeminivirusesareplantvirusescharacterizedbytheiruniquetwinn