我国三种寄主上双生病毒的分子鉴定及序列分析

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1、西南大学硕士学位论文我国三种寄主上双生病毒的分子鉴定及序列分析姓名：阮涛申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：青玲20120531摘要我国三种寄主上双生病毒的分子鉴定及序列分析硕士研究生：阮涛指导教师：青玲摘要双生病毒是一类单链环状DNA病毒，己在世界范围内的多种作物上造成严重危害。自20世纪90年代起，双生病毒己在我国的云南、广西、海南和台湾等多个地区的作物和杂草上发生．为进一步明确我国双生病毒的种类分布及危害，本研究对我国云南巧家辣椒和赛葵，以及陕西番茄和四川赛葵上的双生病毒进行了分子鉴定。从云南巧家地区表现为黄化曲叶症状的辣椒上分离到病毒分离

2、物YN57和YN65。DN√姚全序列分析表明，YN57和YN65DNA-A全长均为2748吣，具有典型的双生病毒科(GI咖拥M，-f‘缸e)基因组DNA．A结构特征，共编码6个ORFs，其中病毒链编码彳订(CP)和彳砣共2个Ol强s，互补链编码4a、彳C2、彳a和彳C年共4个O炳；利用BLAST程序对DNA．A进行分析表明，YN57DN√～-A和YN65DNA．A均与云南赛葵黄脉病毒(拖^襁肌删粥ffDww加h，l加以订，．诞，MY、，．nⅣ)Y160分离物(AJ786711．1)的相似性最高，分别为82．5％和82．4％，与中国番茄黄化曲叶病毒(乃肿口

3、后D)，训拥，如矿翻rfam口’，讥岱，n1，CCNV)Y194分离物(AJ971265．1)次之，分别为79．7％和79．8％。而与其它双生病毒的相似性在79．7％以下，表明YN57和YN65是双生病毒的一个新种，暂命名为中国辣椒黄化曲叶病毒(^印er弦ffDwk妒cll—C鼬懈协W，PⅥ℃CNV)；RDP序列重组分析表明YN65DNA-A是由MY、Ⅳm，-160和瑚CCMl94重组产生；利用双生病毒卫星DNAB的通用引物betaol／l娥a02，从YN57和YN65中均能扩增到DNAp分子；序列分析表明，YN57DNA0和YN65DNAB均与卫星M”

4、，n旧(M”，Y1W伴随的DNAp)相似性最高，在97．O％～99．1％之间，表明巧家辣椒上分离到的PⅥ．CCNV伴随异源卫星分子MYl啪。从陕西泾阳地区的番茄上采集到73份表现矮化、黄化和曲叶症状的番茄黄化曲叶病(T0撇toydlowl∞f砌dise嬲e，聊CD)样品，利用双生病毒简并引物P加B和番茄黄化曲叶病毒(而脚胁弦化，Ⅵ，埘c“，fvf，馏，TYlCv)的通用引物mF厂ryr-R进行PCR扩增，共有70个样品检测星阳性：利用双生病毒DNA．B及卫星DNA的通用引物，未扩增到相应目标条带；随机选取样品SX8，利用滚环扩增PCR(RCA．PCR)、

5、克隆及测序等技术获得病毒DlNJ¨的全基因组序列，该DNA-A分子全长278l鹏(烈412854．1)，与来自山东番茄的rYlCv．SD2西南大学硕士学位论文(GUl99587．1)的核苷酸序列相似性最高，为99．9％；系统进化分析发现，该病毒分离物与我国已报道的聊例各分离物亲缘关系较近。这些结果表明，陕匿番茄黄化曲叶病是由TYlc、，侵染引起，该病毒可能来源于我国山东番茄上的咖Cv。为了明确云南巧家及四川米易赛葵上的双生病毒种类及复合侵染情况，基于RCA-PCR技术，利用双生病毒DNA．．A、DNA-B及卫星DINA的通用引物对31个表现黄脉症状的赛葵

6、样品进行了针对WT’G的检测，从中分离到MY、厂孙Ⅳ、1Ⅵ，CCNV、MY、Ⅳ等3种病毒，其中得到的4个MY、Ⅳ小，分离物均与M叩“Nv吖160相似性最高，在99．3％～99．7％之间，得到的2个1ⅥoCNV分离物均与rylo西n，Y194相似性最高，分别为99．2％和99．7％，得到的1个MY、n，分离物与MW厂V吖206相似性最高，为99．2％。DNA0检测结果显示，除YN86外，25个对WTG检测呈阳性的样品均伴随有DNA9分子，序列分析表明这些DNA9分子可分为两类，分别与MY、厂’nm．Y160(98．4％～98．7％)和MY、但．Y197(9

7、8．5％～98．7％)的序列相似性最高；未扩增到DNA-B组分及DNA旺分子。复合侵染检测结果表明，巧家及米易地区赛葵上的复合侵染率分别为78．57％和72．72％。这些结果表明赛葵样品中双生病毒复合侵染严重，病毒DN√～．A与卫星DNAp以病害复合体形式存在，且卫星DN邱可伴随异源辅助病毒。关键词：双生病毒；辣椒：赛萎；番茄；DNA．A；DNAp；分子鉴定玎Abs仃acCMolecularIdentificationandSequenceAnaIysisofGeminiVirusesonThreeHostPlantsinChinaCandidate：1

8、’aORuanSupeI’Visor：LingQingCollegeofPl锄t