侵染胜红蓟和假马鞭的双生病毒的分子鉴定

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1、浙江大学硕士学位论文侵染胜红蓟和假马鞭的双生病毒的分子鉴定姓名：范三微申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：周雪平2003.5.1致谢本论文是在导师周雪平教授的悉心指导下完成的，从论文立题、构思、实验到撰写的过程中，无不倾注了导师的心血和智慧。导师严谨的治学态度、执着的敬业精神以及在学术方面的造诣。使我在病毒室学习的三年中受益匪浅；导师给予的兄长般的点滴关怀使我倍感温暖。借此机会，我要向一直给予我鼓励和教诲的导师表示诚挚的敬意和深深的感谢!病毒室的李桂新老师在实验室的管理方面尽心尽力，创造了一个良好的学习环境，同时李老师在生活上给予我很多帮助，提出过很多良好的建议，其独特的人格

2、魅力值得我尊敬。吴建祥老师也曾给过我悉心的指导，在此向你们表示衷心的感谢!还有病毒室的兄弟姐妹们，无论在学习还是在生活中你们都是我的良师益朋友，在实验方面你们都曾给过我热心的指导和帮助，在此向你们说声感谢!能与你们在同一个实验室学习我深感荣幸。我也要向所有关心我支持我给过我帮助的朋友表示感谢!最后，我要感谢我的亲人，他们是我能够安心学习的坚强后盾，他们给予我的爱是我人生中最宝贵的财富!范三微2003年5月18日杭州塑望奎堂堡圭兰垡鲨j∑—————————————一摘要本研究对侵銎胜窒[塑(Agerat“，'lconyzoides)和!!!燮(Stachytarphetajamaicensis)

3、的双生病毒进行了分子鉴定，并获得如下结果：+--I●___-_‘a。一利用三抗体夹心ELISA(TAS—ELISA)及PCR检测的方法对采白海南的胜红蓟(Ageratu脚conyzoides)和假马鞭(StachytarpheCajamaicensis)的5个病样进行了检测，表明均为粉虱传双生病毒。PCR扩增产物克隆后进行序列测定，结果表明存在两类双生病毒，其中样品Hn2存在两类病毒的复合侵染。这是在海南首次报道存在有粉虱传双生病毒。在此基础上我们对胜红蓟和假马鞭上WTGs基因组进行了研究。，／从胜红蓟样本Hn2中克隆并测定了两个ONA—A全序列(Hn2一l和Hn2—19)，经NCBI检索和序

4、列比较分析发现，Hn2-t除与胜红蓟黄脉病毒(AYVV，基因登录号X74516)有85．6％的同源性外，其余均在85．0％以下。根据双生病毒全基因组核营酸序列同源性小于89％为不同病毒的原则，我们将这些病毒分离物命名为中国胜红蓟黄脉病毒，英文名为AgeratumyellowveinChinavirus(AYVCNV)。Hn2—19和Hn2—1为Hn2样品中扩增到的不同分子，其基因组序列同源性高达97．7％，这表明Hn2中存在同种双生病毒的不同分离物的复合侵染。从假马鞭样本Hn5和Hn6中克隆并测定了三个DNA—A全序列(Hn5．4、Hn5．1和Hn6-1)，经NCBI检索和序列比较分析发现，H

5、n5．1、Hn5．4和Hn6．1基因组均与亚洲报道的粉虱传双生病毒的基因组同源性最高。Hn5．4、Hn5．1和Hn6．13个序列闯同源性>95％，与印度尼西亚报道的番茄曲叶病毒(ToLCV，基因登录号ABl00305)的同源性最高，为81．5％。根据双生病毒分类命名原则，Hn5．1、Ha5．4和Hn6．1为同种病毒的不同分离物，我们将这些病毒分离物命名为假马鞭曲叶病毒(Stachytarphetaleat"curlvirus，StaLCV)。Hn5一l和Hn5—4为从Hn5样品中扩增到的2个不同的分了，说明Hn5中存在同种病毒不同分离物的复合侵染。^产’一一塑婆查兰堡主兰堡笙壅————————

6、—————————p———————————_————————————————————————一。AbstractGeminivirusesinfectingAgeratumconyzoidesandStac砂tarphetajamaicensiswereidentifiedwithmoleculardatainthispaper．5virussamplescollectedfromAgeratumconyzoidesandStachytarphetajamaicensisinHainanweredetectedwithtripleantibodysandwichELISA(TAS—ELISA)

7、andPCR，resultsshowedallthevirussampleswereinfectedbywhitefly-transmittedgeminiviruses．Sequenceanalysesshowedtwotypesofvirusesexistedamongthosesamples，andsampleHn2wasmix—infectedbytWOtypesofviruses．Ont