侵染昆明玫瑰的李坏死环斑病毒的鉴定及其分子检测

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1、维普资讯http://www.cqvip.com2007年第3期植物检疫PLANTQUARANTINE侵染昆明玫瑰的李坏死环斑病毒的鉴定及其分子检测李春艳丁元明‘何月秋赵明富秦绍钊(1云南省出入境检验检疫局昆明6502282云南农业大学)IdenlificalionandmoleculardetectionofPrtmusnecroticringspotvirusisolatedfromKunming．“Chunyan‘．DingYuanming‘，HeYueqiu2，ZhaoMingfu2，QinShaozhao2，(1Yunnan

2、Entry—ExitInspectionAndQuarantine，YunnanKunmlng650228，2YunnanAgriculturalUniversity，YunnanKunming650201)AbstractThevirescausinglOSemosaicdiseaseinKunmlngwasidentifiedasPrunusnecroticringspotvirus(PNRSV)thro~,hboththemolecularbiologytechnologyandthetraditionaltechnology．

3、Andthediameterofthisspherevirusis22—23nm．，I11eroseinfectedbytheviruspresentssystematicallymosaic。abnormalityandcfimple．，I11econcentrationoftheviresintheshoot，poHenandtopleavesarehighestcomparedwithotherpartsoftheplant．Andthenwiththeprim—ers，designedbasedontheconservativ

4、eregionofthePNⅣCP，wecangaina450bpfragment．While，thenestedRT—PCRWasalsoappliedtodetectthevireswiththepfimemCP1，CP2，P1andP2whichWasprovedtobethemostsen—sitivecomparedwithothertechniques．AndthesimilarityoftheCPsequencesbetweenthisPNRSVandtheknownspe—ciesis98．0％．whichconfir

5、medpathogenofthisdiseaseisPNRSV．KeywordsRose，Pmnnecroticringspotvirus，NestedRT—PCR摘要采集昆明地区种植的花叶症状明显的玫瑰样品，运用现代分子生物学技术与常规技术相结合的方法，初步鉴定引起玫瑰花叶病的主要病毒病原为李坏死环斑病毒。该病毒引起玫瑰植株的系统花叶、畸形和皱缩等症状；电镜下病毒粒体为球形，直径为22～23nm；ELISA检测发现该病毒在植株芽、花粉和顶部叶片的浓度最高；同时，根据外壳蛋白的保守区利用Primer5．0设计该病毒的特异引物，对该病毒

6、进行分子检测，得到450bp的预期DNA片断，并在此基础上，进行了巢式RT—PCR的分子检测，表明巢式RT—PCR的检测能力最强。并通过序列的同源性分析得知该病毒的外壳蛋白与已知PNRSV的同源性为98．0％，进一步证明了该病毒为李坏死环斑病毒。关键词玫瑰李坏死环斑病毒(PNRsV)巢式RT—PCR中图分类号$41李坏死环斑病毒(Pnmu~necroticringspotvirus，斑，有研究表明PNRSV的浓度在一年的不同时期是PNRsV)属雀麦花叶病毒科(Bromovifidae)，等轴不稳变化着的，且该病毒可以通过花粉传播病原。

7、定病毒属(Ilarvims)¨卫J，是我国二类检疫性病害。PNRSV在世界范围内广泛分布，近年来国内陕PNRSV寄主范围广，能自然和人工侵染的寄主达21西、山东、辽宁和北京等地陆续有该病毒病的报个科的双子叶植物，180多种重要的花卉、果树及蔬道_6娟j，其发病率一般在30％～66％以上，严重制约菜作物，引起植株坏死斑、落叶、黄化，甚至全株枯了我国尤其是我省玫瑰鲜切花的产量和质量。近死等症状。主要侵染蔷薇属和李属植物，如：玫瑰、两年来，昆明地区种植的玫瑰发生花叶病，田间病月季、苹果、李、桃、杏、樱桃等n]。其危害作用的株矮化，叶片有明显

8、的褪绿线状和环状斑，严重时严重性因植物种类、种植品种、病毒株系、环境条件系统发育受阻，叶片畸形，植株枯死。本文报道了的不同而不同_4]。在玫瑰上为褪绿色线状和环状从昆明地区种植的症状为花叶的玫瑰病株上的病收稿日期：2O0