核果类果树上李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的血清学与RT-PCR检测

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1、3．ThetotalRNAwasextractedfromsomesamplesshowingpositivereactionforPNRSVandPDVinbothPAS-ELISAandbiologicalindexingandusedastemplatesforReverseTranscriptionPolymeraseChmnReaction(RT-PCR)．PrimerstargetingtospecificsitesofcpgenesofbothPNRSVandPDVwereusedforRT-PCRdetectionofthesetwoviruses．Thetargetprod

2、uctswithexpectedsizes449bpforPNRSVand172bpforPDVwereamplifiedfroma11testedsamples．Keywords：stonefruittree；virus；biologicalindexing；PNRSVPDV；PAS．ELISA；ImPCR3缩略词表4华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文乃如需保密，解密时间年月日是否保密独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中

3、农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。研究生签名：闲真帆加够年多月侈日学位论文使用授权书本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并授权中国科学技术信息研究所和北京万方数据股份有限公司将本人学位论文收录到《中国学位

4、论文全文数据库》，并进行信息服务(包括但不限于汇编、复制、发行、信息网络传播等)，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论文)在解密后适用于本授权书。学位论文作者签名：占迥鸟导师签名：t驾尹，钐签名日期：矽豸年6月『，扣签名日期：口沙孵歹月，岁日注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间1文献综述1．1李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的基本特征1．1．2李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的危害李坏死环斑病毒(Prunusnecroticringspotvirus，PNRSV)是分布较广，经济上比较重要的的李属病毒。在1932年，V

5、aUeaw首次报道了该病毒。Fulton(1970)、Kirkpatrick(1967)报道该病毒可以为害扁桃、杏、樱桃、桃、李等多达21个属的双子叶植物。PNRSV可以造成核果类果树芽和根的坏死，植株生长减慢，果实产量减少，叶片会出现褪绿、内卷等症状，植株矮化，甚至整株枯死，在部分核果类果树会表现出杂色花瓣。Bock(1967)报道PNRSV侵染甜樱桃后产生粗缩花叶症状，侵染杏后产生白花叶症状，侵染玫瑰产生花叶症状，侵染蛇麻草后不显示明显症状。国外对PNRSV的危害研究起步较早，Manganaris等(2003)报道希腊北部的桃园几乎所有的桃都感染了PPV，其中48％同时感染了PNRSV。

6、在我国，刘建等(1998)对桃红叶病病原研究，PNRSV的地高辛标记的cDNA探针与桃红叶病叶提取的总核酸杂交，检测到了特异性杂交点，证实了红叶样品中有PNRSV侵染。阮小风等(1998)报道陕西甜樱桃受到PNRSV的侵染，侵染率达到21．4％。可以看出，PNRSV对核果类果树造成了比较严重的危害作用。而且，PNRSV的危害作用的严重性因植物种类、培养品种、病毒株系、环境条件的不同而不同(MouryB，2000)。李矮缩病毒(Prunedwarfvirus，PDV)是另一种较重要的核果类果树病毒，由Thomas和Hildebrand(1936)在美国首次报道。PDV可以造成核果类果树叶片褪绿

7、、坏死、扭曲，植株矮缩、流胶等等。具体可表现新梢节间变短，叶片密集，叶片变小，叶色较绿或淡，叶缘上卷：花梗变短，花朵密集；有时果实畸形，产量降低。危害症状以春、夏两季节最明显。此外，与PNRSV不同的是，在较低的温度条件下症状更明显(RampitschC，1997)。而且PDV的危害症状随寄主的种类和品种，病毒株系，以及温度状况等而表现出很大的差异。PDV对我国核果类果树的危害在1996年有首次报道(陕西)。