高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立

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1、生物工程学报ChindBiotech2008，November25；24(11)：1895—1901journals．im．ac．cnChineseJournalofBi0technOIOgyISSN1000—3061cjb@im．ac．ca◎2008InstituteofMicrobiology,CAS&CSM,Allrightsresewed高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立王少鹏1,2李际仙1,2彭志刚1,2，曹婧，1中国科学院北京基因组研究所，北京1013002中国科学院研究生院，北京100039摘要：为发现TRP

2、V3调节剂，通过荧光成像分析系统检测钙浓度，建立高通量筛选瞬时受体势V3通道(TransientreceptorpotentialV3，TRPV3)调节剂的细胞模型。将TRPV3表达载体转染人胚’~(HEK一293)~胞，抗生素筛选稳定表达TRPV3的细胞系，选取TRPV3特异性调节剂作用于细胞模型，应用荧光成像分析系统测钙实验检测TRPV3高表达细胞系药理学特征，同时优化实验条件，考察模型的稳定性，并评估应用于96孔板及384孔板进行高通量筛选的可靠性及准确性。获得了高表达TRPV3的HEK一293稳定细胞系，通过TRPV3离子通道调

3、节的钙流信号与TRPV3特异性调节剂成剂量依赖关系，优化得到了最适筛选条件，该模型稳定，灵敏，通过z因子及Spiking检测，完全符合高通量筛选需求。利用此细胞模型通过检测钙信号可筛选TRPV3调节剂。关键词：TRPV3，高通量筛选，细胞模型EstablishmentofaCellBasedHighThroughputScreeningModelforTransientReceptorPotentialV3ModulatorsShaopengWang，JixianLi一，ZhigangPeng，_，andJingCao'1Beijing

4、GenomicsInstitute，ChineseAcadentyofSciences，Be~mg101300，China2GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences，Beijing100039，ChinaAbstract：WeestablishedacellbasedhighthroughputscreeningmodelbycalciumassayonfluorometricimagingplatereaderforfindingmodulatorsofTRPV3．TheTRPV3exp

5、ressionvectorwastransfectedintoHEK一293andstablecelllineexpressingTRPV3wasselectedwithantibiotics．UponTRPV3specificmodulatorsstimulated，pharmacologicalcharacteristicsofTRPV3overexpressioncel1lineweredetectedbycalciumassayonfluorometricimagingplatereader．Assayconditionswer

6、eoptimizedandstabilityofthemodelwasobserved．Thereliabilityandaccuracyofapplicationto96and384wellformathighthroughputscreeningwerealsoevaluated．AstableHEK一293cel1linehighlyexpressingTRPV3wasestablished．TRPV3specificmodulatorscouldmodulatecalciumsignalthroughTRPV3indosedep

7、endentmanner．Optimizedscreeningconditionwasestablishedbyassaydevelopment．Thismodelisstableandsensitive，andmeetstherequirementofhighthroughputscreeningbyZ’factorvalidationandSpikingtest．ThiscellmodelcallbeappliedtoscreeningTRPV3modulatorsbycalciumassay．Keywords：TRPV3，high

8、throughputscreening，cellmodel瞬时受体势(TRP)通道是人类感觉系统的先驱，应从细胞内至细胞外的多种刺激。而且其功能比传应答温度、触觉、疼痛、渗透压、味觉等，可以响统的感觉传递更