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时间:2019-05-18
《高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物工程学报ChindBiotech2008,November25;24(11):1895—1901journals.im.ac.cnChineseJournalofBi0technOIOgyISSN1000—3061cjb@im.ac.ca◎2008InstituteofMicrobiology,CAS&CSM,Allrightsresewed高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立王少鹏1,2李际仙1,2彭志刚1,2,曹婧,1中国科学院北京基因组研究所,北京1013002中国科学院研究生院,北京100039摘要:为发现TRP
2、V3调节剂,通过荧光成像分析系统检测钙浓度,建立高通量筛选瞬时受体势V3通道(TransientreceptorpotentialV3,TRPV3)调节剂的细胞模型。将TRPV3表达载体转染人胚’~(HEK一293)~胞,抗生素筛选稳定表达TRPV3的细胞系,选取TRPV3特异性调节剂作用于细胞模型,应用荧光成像分析系统测钙实验检测TRPV3高表达细胞系药理学特征,同时优化实验条件,考察模型的稳定性,并评估应用于96孔板及384孔板进行高通量筛选的可靠性及准确性。获得了高表达TRPV3的HEK一293稳定细胞系,通过TRPV3离子通道调
3、节的钙流信号与TRPV3特异性调节剂成剂量依赖关系,优化得到了最适筛选条件,该模型稳定,灵敏,通过z因子及Spiking检测,完全符合高通量筛选需求。利用此细胞模型通过检测钙信号可筛选TRPV3调节剂。关键词:TRPV3,高通量筛选,细胞模型EstablishmentofaCellBasedHighThroughputScreeningModelforTransientReceptorPotentialV3ModulatorsShaopengWang,JixianLi一,ZhigangPeng,_,andJingCao'1Beijing
4、GenomicsInstitute,ChineseAcadentyofSciences,Be~mg101300,China2GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences,Beijing100039,ChinaAbstract:WeestablishedacellbasedhighthroughputscreeningmodelbycalciumassayonfluorometricimagingplatereaderforfindingmodulatorsofTRPV3.TheTRPV3exp
5、ressionvectorwastransfectedintoHEK一293andstablecelllineexpressingTRPV3wasselectedwithantibiotics.UponTRPV3specificmodulatorsstimulated,pharmacologicalcharacteristicsofTRPV3overexpressioncel1lineweredetectedbycalciumassayonfluorometricimagingplatereader.Assayconditionswer
6、eoptimizedandstabilityofthemodelwasobserved.Thereliabilityandaccuracyofapplicationto96and384wellformathighthroughputscreeningwerealsoevaluated.AstableHEK一293cel1linehighlyexpressingTRPV3wasestablished.TRPV3specificmodulatorscouldmodulatecalciumsignalthroughTRPV3indosedep
7、endentmanner.Optimizedscreeningconditionwasestablishedbyassaydevelopment.Thismodelisstableandsensitive,andmeetstherequirementofhighthroughputscreeningbyZ’factorvalidationandSpikingtest.ThiscellmodelcallbeappliedtoscreeningTRPV3modulatorsbycalciumassay.Keywords:TRPV3,high
8、throughputscreening,cellmodel瞬时受体势(TRP)通道是人类感觉系统的先驱,应从细胞内至细胞外的多种刺激。而且其功能比传应答温度、触觉、疼痛、渗透压、味觉等,可以响统的感觉传递更
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