基质γ-羧基谷氨酸蛋白（MGP）相互作用蛋白的筛选研究

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1、分类号：单位代码：１０１４０密级：公开学号：４０３１５３１８６４Ｉ＠ＬＩＡＯＮＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文ＴＨＥＳＩＳＦＯＲＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥ基质－羧基谷氨酸蛋白ＭＧＰ相互作用蛋白γ（）论文题目：的筛选研究ＳｔｕｄｏｎｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｏｆＭａｔｒｉｘＧｌａＰｒｏｔｅｉｎＭＧＰｙｇ（）ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｒｏｔｅｉｎｓ英文题目：ｇｐ论文作者：常洋涛指导教师：芦秀丽教授专业：生物化学与分子生物学完成时间二〇一八年五月：辽宁大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文

2、是本人在导师的指导下独立完成的。论文中取得的研究成果除加以标注的内容外，不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中进行了标注，并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：月曰７？〇学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权辽宁大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据

3、库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国博士学位论文全文数据库》和《中国优秀硕士学位论文全文数据库》并通过网络向社会公众提供信息服务。学校须按照授权对学位论文进行管理，不得超越授权对学位论文进行任意处理。＇。（保密保密（），在年后解密适用本授权书：请在括号内＿“”划Ｖ）＊授权人签名：指导教师签名？方泰Ａ曰期：以ｈ年Ｓ月如日日期：年Ｉ月；曰申请辽宁大学硕士学位论文基质γ-羧基谷氨酸蛋白（MGP）相互作用蛋白的筛选研究Studyonth

4、escreeningofMatrixGlaProtein（MGP）interactingproteins作者：常洋涛指导教师：芦秀丽教授专业：生物化学与分子生物学答辩时间：2018年5月二○一八年五月·中国辽宁摘要摘要肾结石是泌尿外科常见病，发病率仅次于尿路感染和前列腺疾病，是泌尿外科第三大多发病，且具有较高复发率，临床常表现为肾脏功能损害和尿路梗阻。目前肾结石疾病的形成机制尚不明确，已有研究表明蛋白质与肾结石形成密切相关，在结石的形成过程中发挥着重要作用。基质γ-羧基谷氨酸蛋白（MGP）是由多个谷氨酸残基构成的维生素K依赖的分泌蛋白，在人体中多个组织器官中均有表达。目前已

5、经确认其在调节细胞外基质钙化过程中起重要作用，且已发现其对血管钙化有抑制作用，并可能与骨形态发生蛋白-2（BoneMorphogeneticProtein,BMP-2）的相互作用有关。一些研究发现MGP蛋白与肾结石形成也有密切相关性，其可能有抑制结晶形成的功能，但分子机制尚不清楚。而系统筛选和研究MGP的相互作用蛋白，能进一步阐明其与肾结石形成的关系和分子机制。因此本实验拟通过T7噬菌体展示系统从人cDNA文库中钓取MGP相互作用蛋白，并对其与互作蛋白之间的相互作用进行初步研究。首先，我们以pT7CFE1-NHis-GST-CHA为载体构建哺乳动物真核表达系统用的MGP表达

6、质粒pT7CFE1-NHis-GST-CHA-MGP，通过蛋白体外表达系统得到大量的人源MGP蛋白。接着以体外表达得到的人MGP蛋白为诱饵蛋白，在ELISA板上进行包被，然后使用人cDNA文库T7噬菌体展示系统，筛选可能与MGP存在相互作用的多肽，PhageEILSA法进一步筛选验证所得多肽是否与MGP存在相互作用，筛选确认了SLC27A6等12个与MGP可能存在相互作用的候选互作蛋白。最后利用分子模拟的方法对MGP蛋白及SLC27A6进行了同源建模和分子对接研究，在计算机水平上确认了其存在相互作用，并初步研究了其蛋白相互作用的方式。综上所述，本实验成功构建了MGP的高效表

7、达质粒，并在体外实现了MGP蛋白的高效表达，再以得到的MGP蛋白为诱饵蛋白，利用T7噬菌体表达筛选系统在体外成功的筛选验证得到了MGP的12个候选相互作用蛋白，为进一步研究MGP蛋白抑制肾结石形成的分子机制以及其他生理功能奠定了基础。关键词：肾结石疾病，MGP，T7噬菌体展示系统，互作蛋白筛选，分子模拟IAbstractABSTRACTKidneystonesarecommondiseasesinurology.Theincidencerateissecondonlytourinarytractinfections