LKB1过表达对人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移的影响

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1、中图分类号：R736.1论文编号：2018307096UDC：密级：公开硕士学位论文LKB1过表达对人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移的影响作者姓名：黄志强学科名称：外科学研究方向：普外科胃肠腺体肿瘤学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2018年4月11日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：张国志教授单位：华北理工大学附属医院论文评阅人：马晓龙主任医师单位：唐山市工人医院陈俊卯主任医师单位：华北理工大学附属医院论文答辩日期：2018年5月21日答辩委员会主席：田炜教授关键词：甲状腺乳头状癌；

2、LKB1；增殖；迁移；细胞周期唐山华北理工大学2018年6月EffectofLKB1OverexpressiononProliferationandMigrationofHumanThyroidPapillaryCarcinomaCellsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinical

3、MedicinebyHuangZhiqiang(Surgery)Supervisor:ProfessorZhangGuozhiJune,2018独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：2018年

4、4月11日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：2018年4月11日签字日期：2018年4月11日摘要摘要目的探讨LKB1过表达对人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移的影响。方法

5、首先利用Westernblot检测正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞和甲状腺乳头状癌K1细胞中LKB1蛋白的表达；其次将生长状态良好的甲状腺乳头状癌K1细胞随机分为Control组、NC组和Lenti-h-LKB1组，其中Control组不做任何处理，NC组转染携带GFP的空载病毒，Lenti-h-LKB1组转染携带GFP的LKB1重组真核体，72h后在倒置荧光显微镜观察GFP表达并判断转染效率。取转染效率大于80%的细胞备用。RealtimePCR法检测各组细胞内LKB1mRNA表达，West

6、ernblot法检测细胞内LKB1蛋白表达，从而验证LKB1过表达细胞模型是否构建成功。利用MTT法分别于转染成功后24h、48h、72h、96h后检测各组细胞增殖能力。转染成功后24h，利用Transwell实验检测各组细胞迁移能力，流式细胞仪分析各组细胞周期变化。结果与正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞相比，K1细胞中LKB1蛋白表达降低，差异具有统计学意义（t=40.376,P＜0.01）。转染72h后在倒置荧光显微镜下观察，当感染复数（MOI）约60时，病毒转染效率达80%以上。Real

7、timePCR结果显示，Lenti-h-LKB1组LKB1mRNA相对表达量为(5.992±0.610)，高于Control组(1.000±0.000)、NC组(1.065±0.198)，差异具有统计学意义（F=444.557,P＜0.01），Control组与NC组之间无明显差异(P>0.05)。Westernblot结果与RealtimePCR结果一致，Lenti-h-LKB1组LKB1蛋白相对表达量为(1.152±0.042)，显著高于Control组(0.339±0.021)和NC组(0.

8、343±0.049)，差异具有统计学意义（F=428.530,P＜0.01），Control组与NC组之间无明显差异（P>0.05），说明成功构建LKB1过表达细胞模型。MTT实验结果显示，48h、72h、96hLenti-h-LKB1组细胞增殖能力均低于Control组和NC组，差异具有统计学意义（P均＜0.01），而24h各组细胞增殖能力无明显差异（P>0.05）。Transwell实验结果显示，Lenti-h-LKB1组平均穿膜细胞数为(118.000±7.714)个/视野，