多能干细胞中稳定表达转录因子FoxA2的细胞特性研究

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1、硕士学位论文摘要转录因子FoxA2是胚胎发育过程中神经产生的重要调节因子。研究发现维甲酸诱导的P19多能性干细胞定向神经分化过程中出现FoxA2的表达。为了进一步探讨FoxA2在干细胞向神经分化过程中的作用，我们建立了可以稳定表达GFP．FoxA2融合蛋白的P19细胞株．P19一GFP．rFoxA2细胞株。GFP．FoxA2融合蛋白的稳定表达导致P19一GFP-rFoxA2细胞中多能性相关基因Nanog和Sox2的表达降低和碱性磷酸酶的活性降低，但不影响多能性基因Oct4的表达；同时，该细胞中神经干细胞标志物Nestin的表达以及Pro

2、minin—l阳性细胞数目的增多，说明FoxA2的稳定表达促使P19细胞部分丧失干细胞特征并导致神经干细胞特性的出现。另外，P19．GFP．rFoxA2细胞中出现神经细胞分化相关基因NeuroDl的表达。我们证实了FoxA2可以结合NeuroDl的启动子调节其活性，说明NeuroDl是FoxA2的下游靶基因。进一步研究发现：RA诱导P19-GFP—rFoxA2细胞神经分化过程中NeuroDl的表达量升高；P19．GFP．rFoxA2细胞在没有RA悬浮培养的过程中同样发现NeuroDl的表达升高，表明FoxA2可以通过调节NeuroDl促

3、进多能性细胞向神经方向分化。我们的结果表明P19．GFP．FoxA2cell具有了部分神经细胞特性，FoxA2在促进P19多能性干细胞神经分化过程中发挥着重要的作用。关键字：FoxA2；RA诱导；神经分化；P19．GFP．rFoxA2细胞；神经细胞特性Ⅱ多能干细胞中稳定表达转录因子FoxA2的细胞特性研究AbstractTranscriptionfactorFoxA2playsacriticalroleinneuraldifferentiationduringembryonicdevelopment．Ourstudyhasfoundth

4、atFoxA2isexpressedduringneuraldifferentiationofP19pluripotentembryonalcarcinomacells．TofurtherunderstandthebiologicalrolesofFoxA2duringthisprocess，wehaveestablishedthestableexpressionofaGFP-rFoxA2fusionproteininP19pluripotentembryonalcarcinomacells，namedP19-GFP-rFoxA2cel

5、ls．ThestableexpressionofGFP-rFoxA2fusionproteinresultsindecreasingexpressionofpluripotency·relatedtranscriptionfactorsNanogandSox2andreducingactivityofalkalinephosphatase，thoughthecellsstillexpresspluripotency-relatedtranscriptionfactorsOct4．IncreasedNestinexpressionleve

6、lsandProminin-1+populationshavebeenobservedinP19-GFP-rFoxA2cells，implicatingthatthestableexpressionofFoxA2leadsP19cellstolosingpluripotencyandgainingpartialcharacteristicsofneuralstemcells．TheexpressionofneurogenictranscriptionfactorNeuroD1alsoexpressesinP19一GFP—rFoxA2ce

7、lls．WeconfirmthatthepromoterofNeuroD1isboundandactivatedbyFoxA2directly,suggestingthatNeuroD1isoneofFoxA2downstreamtargetgenes．Furthermore，amorerapidelevationofNeuroD1expressionisfoundduringRA·-inducedP19··GFP··rFoxA2cellneuraldifferentiationandasamephenomemonisobservedi

8、nsuspensioncultureofP19-GFP·rFoxA2cellswithoutRAimplicatingthatFoxA2Canpromotepluripotentstemcellstoneu