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时间:2019-05-20
《多能干细胞中稳定表达转录因子FoxA2的细胞特性研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、硕士学位论文摘要转录因子FoxA2是胚胎发育过程中神经产生的重要调节因子。研究发现维甲酸诱导的P19多能性干细胞定向神经分化过程中出现FoxA2的表达。为了进一步探讨FoxA2在干细胞向神经分化过程中的作用,我们建立了可以稳定表达GFP.FoxA2融合蛋白的P19细胞株.P19一GFP.rFoxA2细胞株。GFP.FoxA2融合蛋白的稳定表达导致P19一GFP-rFoxA2细胞中多能性相关基因Nanog和Sox2的表达降低和碱性磷酸酶的活性降低,但不影响多能性基因Oct4的表达;同时,该细胞中神经干细胞标志物Nestin的表达以及Pro
2、minin—l阳性细胞数目的增多,说明FoxA2的稳定表达促使P19细胞部分丧失干细胞特征并导致神经干细胞特性的出现。另外,P19.GFP.rFoxA2细胞中出现神经细胞分化相关基因NeuroDl的表达。我们证实了FoxA2可以结合NeuroDl的启动子调节其活性,说明NeuroDl是FoxA2的下游靶基因。进一步研究发现:RA诱导P19-GFP—rFoxA2细胞神经分化过程中NeuroDl的表达量升高;P19.GFP.rFoxA2细胞在没有RA悬浮培养的过程中同样发现NeuroDl的表达升高,表明FoxA2可以通过调节NeuroDl促
3、进多能性细胞向神经方向分化。我们的结果表明P19.GFP.FoxA2cell具有了部分神经细胞特性,FoxA2在促进P19多能性干细胞神经分化过程中发挥着重要的作用。关键字:FoxA2;RA诱导;神经分化;P19.GFP.rFoxA2细胞;神经细胞特性Ⅱ多能干细胞中稳定表达转录因子FoxA2的细胞特性研究AbstractTranscriptionfactorFoxA2playsacriticalroleinneuraldifferentiationduringembryonicdevelopment.Ourstudyhasfoundth
4、atFoxA2isexpressedduringneuraldifferentiationofP19pluripotentembryonalcarcinomacells.TofurtherunderstandthebiologicalrolesofFoxA2duringthisprocess,wehaveestablishedthestableexpressionofaGFP-rFoxA2fusionproteininP19pluripotentembryonalcarcinomacells,namedP19-GFP-rFoxA2cel
5、ls.ThestableexpressionofGFP-rFoxA2fusionproteinresultsindecreasingexpressionofpluripotency·relatedtranscriptionfactorsNanogandSox2andreducingactivityofalkalinephosphatase,thoughthecellsstillexpresspluripotency-relatedtranscriptionfactorsOct4.IncreasedNestinexpressionleve
6、lsandProminin-1+populationshavebeenobservedinP19-GFP-rFoxA2cells,implicatingthatthestableexpressionofFoxA2leadsP19cellstolosingpluripotencyandgainingpartialcharacteristicsofneuralstemcells.TheexpressionofneurogenictranscriptionfactorNeuroD1alsoexpressesinP19一GFP—rFoxA2ce
7、lls.WeconfirmthatthepromoterofNeuroD1isboundandactivatedbyFoxA2directly,suggestingthatNeuroD1isoneofFoxA2downstreamtargetgenes.Furthermore,amorerapidelevationofNeuroD1expressionisfoundduringRA·-inducedP19··GFP··rFoxA2cellneuraldifferentiationandasamephenomemonisobservedi
8、nsuspensioncultureofP19-GFP·rFoxA2cellswithoutRAimplicatingthatFoxA2Canpromotepluripotentstemcellstoneu
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