过表达转录因子诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞的研究

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1、万方数据分类号：Q码密级：坌五中文论文题目：．专：j、单位代码：10335硕士学位论文⑧Q∑皇￡旦蚤卫!壁璺签i望g：圣：!=垒塾垒￡!i卫童iQ坠至垒￡重Q!=墨万方数据过表达转录因子诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞的研究⑧IIIIHIPIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIUlY31193论文作者签名：；氢坠指导教师签名：(益绉论文评阅人1：萄娘评阅人2：鱼垫评阅人3：郭晚会答辩委员会主席：盈固熊．委员1：逍圭委员2：幽盈委员3：委员4：委员5：答辩日期：wI6年d多月口宕日万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明

2、本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：畜堪才＼签字日期：卅绰弓月譬日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙弦堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝江太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

3、进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：离钳氛签字日期：-wl6年孓月g日月万方数据浙江大学硕士学位论文致谢时光荏苒，岁月如梭，我入读浙江大学动物科学学院已近三年。回首这三年的时光，初次联系导师的忐忑与欢欣，通宵达旦做实验的疲惫与欣喜，每一次相聚离别的欢乐和感伤都历历在目，犹如昨日。值此论文完成之际，心中百感交集，有着对这三年在生活学习工作上帮助过我的老师同学有说不完的感谢。首先最想感谢的是我的导师肖磊教授。本研究论文是在导师肖磊教授的悉心指导

4、下完成的。是我的导师肖磊教授引导我走上科研的道路。导师渊博的专业知识，活跃的思维方式，严谨的科研态度，认真做事的原则对我今后的人生有很大的影响，以及他朴实正直、平易近人的人格魅力对我影响深远。在这三年的学习生涯中，导师在我生活和学习中给予的精心指导和关怀，尤其是在我困惑和失败时给予我理解和鼓励，让我受益无穷。在此，谨向导师表示最真挚的感谢!感谢崔春老9币和孙文采老师为实验室了一个良好的实验环境，使我可以在实验室专注顺利地进行实验。也感谢她们给予我在生活学习上的指导和关心。感谢陈海德师兄、李阳师兄和林喜娟师姐在实验上给我的悉心指导

5、和帮助，使我的实验设计和操作能力有了很大的提高，感谢你们，因为你们我才可以顺利开始我的科研之路。感谢饶灵均师兄、鲍磊师兄、何丽夏子师姐、卢鹏飞师兄、李文玲师姐、崔迪师姐和曾晔临师姐，感谢你们在实验设计、实验操作以及论文撰写上对我的指导和帮助。感谢和我一同入学的同学石磊、李文静、林敏和汪进平，感谢你们和我一起并肩作战和共同进步。感谢各位评审委员老师在论文评审过程中给予的宝贵建议。感谢各位答辩委员会老师在答辩程序上给予的悉心指导。感谢家人给予的无条件理解和支持，你们是我坚持下去的最大动力。最后，再次感谢在我成长过程中给予我帮助的所有

6、人，谢谢你们!高琳2016年01月万方数据浙江大学硕士学位论文摘要过表达转录因子诱导人胚胎干细胞定向分化为腋岛素分泌细胞的研究摘要人胚胎干细胞自建立以来就被认为是研究细胞分化、发育、进行药物筛选和推动再生医疗的有力工具。人胚胎干细胞具有在体外无限增殖的能力以及分化为三胚层所有细胞的潜能，这些特性使得需要大规模细胞移植的治疗手段成为可能。在本课题中我们研究发现通过在培养基中添加Activinh和分别过表达胰腺内分泌祖细胞标记因子Ngn3和成熟胰岛B细胞标记因子Mafa，可高效诱导人胚胎干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞。整个分化的过程

7、经历了多能胚胎干细胞、定性内胚层、原肠管、前肠后部、胰腺内胚层和终末分化的胰岛素分泌细胞这几个阶段，这与成熟的在体外通过添加细胞因子和小分子将人胚胎干细胞分化成为胰岛素分泌细胞的方法过程类似。通过分别对Ngn3和Mafa持续过表达时间的控制我们发现外源基因持续表达9天的时间就足以诱导人胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化。据我们所知，这是首次通过单个转录因子诱导人胚胎干细胞在体外分化为胰岛素分泌细胞。一方面，这为人胚胎干细胞在糖尿病治疗中的应用打下一定基础。另一方面，这也可以可以帮助我们更好地理解胰腺在发育和分化过程怎样决定细胞的不同

8、命运的机制。关键词：人胚胎干细胞、胰岛素分泌细胞、Ngn3、Mafa、定向分化万方数据StudyofDirectDifferentiationofEmbryonicStemCellstoInsulin．secretingCellsbyOverexpressing