GnRH类似物对体外培养肝癌细胞FasFasL基因表达的影响

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1、第四军医大学硕士学位论文缩略词表缩写英文全称中文名称GnRHGonadotropin·releasing促性腺激素释放激素hormoneSABCStrepavidin-Biotin-Peroxidase链霉亲和素。生物素化Complex过氧化物酶复合物Luteinizinghormone—releas—黄体生成素释放激素inghormonecDNAComplementaryDNA互补DNAPCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应HCCHepatocellularcarcinoma肝细胞性肝癌PBSPhosphatebufferedsal

2、ine磷酸盐缓冲液PCRPolymemsechainreaction聚合酶链式反应BSABovineserumalbumin牛血清白蛋自DABDiaminobenzedin二氨基联苯胺TNFTumournecrosisfactor肿瘤坏死因子NGFNervegrowthfactor神经生长因子FSHFollicle—stimulatinghormone卵泡刺激素LHLuteinizinghormone黄体生成素第四军医大学硕士学位论文GnRH类似物对体外培养肝癌细胞Fas／FasL基因表达的影响硕士研究生袁彪指导教师张远强教授辅导教师张金山副教授(第四军医大学基

3、础部组织学与胚胎学教研室，西安710032)摘要Jf我国属肝癌高发区，由于肝癌恶性程度高，目前仍是严重威胁犬类生命的主要疾病之一。原发性肝癌或称肝细胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，由于大多数肝癌患者在就诊时己属中晚期，因而丧失了手术机会。而化疗和放疗等综合治疗的效果并不满意，因此迫切需要找到一种更加高效、安全的治疗方法。近年来肿瘤的内分泌治疗作为一种高效低毒的治疗方法，已引起众多肿瘤病理学家和临床工作者的重视。促性腺激素释放激素(gonadotropin—releasinghormone．GnRH)是由下

4、丘脑神经元分泌的一种含有十个氨基酸的肽类激素，经下丘脑一垂体一门脉系统进入垂体前叶，作用于垂体前叶的促性腺激素分泌细胞，刺激卵泡刺激素(folliclestimulatinghormone，FSH)和黄体生成素(1uteinizinghormone，LH)的分泌，从而调节性腺的发育与配子的形成。已有大量证据表明，乳腺、前列腺、卵巢、垂体基金项目：国家自然科学基金资助项目(39900142)第四军医大学硕士学位论文和胰腺肿瘤细胞上存在GnRH结合位点，GnRH类似物可抑制这些肿瘤细胞的生长。实验研究还发现，GnRH的肿瘤抑制效应是不依赖于垂体促性腺激素释放的独立机

5、制实现的。已有研究表明，肝癌细胞上存在GnRH结合位点，GnRH类似物在体外可抑制肝癌细胞的生长，但其具体机制仍不明了，有推测认为是通过增加细胞的凋亡导致的。实验研究和临床观察均提示肝癌可能是一种激素依赖性肿瘤。已有文献报道体外培养人肝癌细胞上有GnRH受体，天然的GnRH对肝癌细胞的生长有抑制作用。Fas又称APO．1，现命名为CD95，是两个研究组于1989年在各自的实验室发现的。Fas属于肿瘤坏死因子(TNF)受体和神经生长因子(NGF)受体家族。而FasL是Fas在人体内的天然配体1994年Suda等利用亲和层析技术从鼠细胞毒性T淋巴细胞中纯化发现的。F

6、as是细胞凋亡的信号分子，表达Fas的细胞在与Fas抗体或自然存在的FasL以三聚体形成结合后，可活化并传导凋亡信号，触发Fas所在靶细胞数小时内凋亡。目前研究表明，Fas与FasL在肿瘤／发生、发展及转移中有重要作用。y，为进一步探讨GnRH及其受体与肝癌细胞、Fas／FasL与肝癌细胞相关生物学特性的关系，我们进行了以下研究：①用免疫组织化学方法检测SMMC7721肝癌细胞中GnRH及其受体的表达，●■●_■一以证实SMMC7721肝癌细胞为C／nRH-R阳性细胞；②采用免疫组织化学SABC法，检测Fas／FasL在SMMC7721肝癌细胞的表达，为进一步探

7、讨Fas／FasL系统对肿瘤细胞生长的调控作用提供形态●_●■■■_■■一学依据；③利用半定量RT-PCR技术(QRT-PCR)，检测不同浓度GnRI-I类似物刺激下SMMC7721肝癌细胞中Fas／FasL．mRNA表达水平变化。上述研究对揭示CmRH对肝癌细胞增殖阻抑作用的部4第四军医大学硕士学位论文分机理以及GnRH．R介导的肝癌细胞信号传导的部分通路，为深入研究GnRH类似物在治疗肿瘤中的作用提供理论依据。厂庄要研究结果如下：lL1．本实验通过免疫组织化学的方法检测到SMMC7721中有GnRH受体蛋白的表达，SMMC7721肝癌细胞中GnRH及其受体蛋

8、白均呈黄褐色颗粒定位于胞