鸦胆子油乳体外诱导人肝癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响

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1、兰州医学院硕士学位论文鸦胆子油乳体外诱导人肝癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响姓名：张月宁申请学位级别：硕士专业：内科学（消化系病）指导教师：马力2003.5.1兰州医学院硕士学位论文鸦胆子油乳体外诱导人肝癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响中文摘要目的研究鸦胆子油乳体外抑制人肝癌细胞S删C-7721增殖和诱导人肝癌细胞凋亡的作用，及其对细胞周期和细胞凋亡相关基因p53、bcl一2表达的影响，探讨鸦胆子油乳的抗肿瘤机制。方法MTT法检测鸦胆子油乳不同浓度和作用时间对肝癌细胞SMMC一7721的抑制增殖作用：普通光学显微镜、免疫荧光显微镜、透射电镜

2、观察细胞形态学改变：琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA特征；流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的分布；免疫细胞化学染色检测p53、bcl-2的表达水平。结果鸦胆子油乳对人肝癌细胞S潮C-7721具有显著的抑制增殖作用(仄O．01)，且有时间和浓度依赖性。普通光学显微镜、免疫荧光显微镜、透射电镜可观察到凋亡特征性的形态学特征改变：细胞固缩，染色质凝集，细胞核碎裂，蛋白质片断化，凋亡小体形成。琼脂糖凝胶电泳显示加药组细胞DNA呈现梯带状，是为凋亡特征性的生化特征改变：而对照组细胞DNA呈现模糊的条带状。0．109／L鸦胆子油乳作用12、24、48h后，

3、流式细胞仪分析可见由凋亡细胞形成的典型的亚二倍体峰，GO／G1期细胞明显增多，表明细胞周期被阻滞于GO／G1期，与对照组相比有显著性差异(p(O．01)。p53、bcl—2在经鸦胆子油乳作用后表达水平均下降，二者呈正相关(r=O．966，p(O．05)，兰州医学院硕士学位论文p53下降更为明显。结论鸦胆子油乳体外对人肝癌细胞SMMC一7721有显著的抑制增殖作用。诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期于GO／G1期，抑制p53、bcl-2的表达是其重要机制，其中p53途径起主导作用。鸦胆子油乳抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡是其重要的临床应用基础。关

4、键词鸦胆子油乳，肝癌细胞，细胞凋亡，细胞周期，凋亡相关基因兰型垦堂堕堡主兰垡堡壅一THEEFFECTSOFSEMlNALOILEMULSIONOFBRUCEAJA～ANICAONAPOPTOSISANDAPOPTOSIS—RELATEDGENESINHUMANHEPATOCELLULARCARCINOMACELLSABSTRACTObjeetiveToexploretheanti-tumormechanismofseminaloilemulsionofBruceaJavanicabystudyinginvitroitseffectsonth

5、eapoptosis，thecellcycleandtheexpressionsofapoptosis-relatedgenesp53andbcl一2inhumanhepatocellularcarcinomaeelllineSMMC·7721．MethodsAnti-proliferationeffectwasmeasuredbyMTTassay．ThemorphologyofcellsWasobservedunderlightmicroscope，fluorescentmicroscopetransmissionelectronmicr

6、oscope，respectively．AgarosegeleleetrophoresiswasusedtoanalyzecellDNAcharacters．TheflowcytometryWaSusedtodetectapoptoticrateandcellcycledistribution．Thelevelsofp53andbcl-2proteinwereexaminedbyimmunoeytochemicalstaining．ResultsTheproliferationofhepatocellularcarcinomacellSMM

7、C．7721couldberemarkablyinhibitedbyseminaloilemulsionofBruceajavanicaina3整塑至堂煞蹩圭兰堡垒塞一——time+andconcentration-dependentmanner(p<0．01)+Morphologicalchangescharacteristicofapoptosiswereobservedthroughlightmicroscope，fluorescentmicroscope,electronmicroscope：cellshrinkage，chroma

8、tincondensation，cellnucleuscollapses，proteinf，agmantation，apoptoticbodies．Agarosegele

9、ect