CpG+ODN激活慢性HBV感染者免疫细胞功能的研究

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1、摘要目的：探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对慢性HBV感染者PBMC、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和DC等各种免疫细胞产生免疫应答的影响，进一步阐明慢性HBV免疫发病机制，为慢性HBV肝炎患者开创新的免疫治疗方法提供实验基础。方法：应用密度梯度离心法，从随机选取的慢性HBV感染者(免疫耐受组和免疫清除组)和健康对照者的外周静脉血分离PMBC，部分病例通过免疫磁珠技术(IBT)进一步纯化CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和DC，并经过流式细胞术(FCM)

2、验证其分离效果，用CpGODN、HBsAg、M[CpGODN+HBsA91、分别与试验者的PBMC、纯化的CD4+T细胞和纯化的CD8+T细胞孵育，采用ELISPOT检测慢性HBV感染者特异性Thl细胞反应和FCM检测CTL的激活能力，通过对感染者外周血中IFN吖分泌量和CD8+T淋巴细胞表面CDl07表达情况的测定，判断CpGODN激活慢性HBV感染者免疫细胞的能力。结果：HBsAg和M[HBsAg+CpGODN]分别与慢性HBV感染者的PBMC、纯化的CD4+T细胞和CD8+T细胞孵育后在不同免

3、疫状态组内的比较：其中PBMC和纯化的CD4+T细胞产生IFN吖斑点数及纯化的CD8+T淋巴细胞表面CDl07的表达均没有显著性差异(胗O．05)；但在免疫清除和正常对照组的PBMC中CD8+T淋巴细胞表达的CDl07有显著性差异(尸免疫清除组=0．008和P健康对照组=O．007)，且CDl07a远高于CDl07b的比例。另外，M刺激PBMC比纯化的CD4+T细胞产生的IFN-7斑点数多，且均有显著性差异(P=-0．000)；M刺激慢性HBV感染者PBMC、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞，

4、在不同免疫之间的两两比较：无论是PMBC和CD4+T淋巴细胞产生的IFN吖斑点，还是CD8+T淋巴细胞表面CDl07的表达均有显著性差异(尸

5、a和CDl07b的表达，但HBsAg与M比较无显著性差异，且II摘要CpGODN对PBMC刺激效果优于CD4+T淋巴细胞。然而，在免疫清除状态，CpGODN能显著增加HBsAg刺激慢性HBV感染者PBMC中的CD8+T淋巴细胞表面CDl07a和CDl07b的表达。利用免疫磁珠技术分离PBMC中DC的方法对于研究纯化的DC功能具有切实可行的意义。关键词：寡核苷酸序列分析；肝炎病毒，乙型，慢性；单个核细胞；CD4+T淋巴细胞；CD8+T淋巴细胞：树突状细胞IIIAbstractABSTRACTobjec

6、tive：TostudytheeffectsofCpGoligodeoxyribonucleotide(ODN)asadjuvantontheinlnauneresponsesinPBMC、CD4+Tcell、CD8+TcellandDCwithchromehepatitisBvirus．SOastofurtherexploretheimmunopathogenesismechanismsofcllromchepatitisBvirus．Theseinformationprovidesaexperi

7、mentalbasisofnewimmunotherapyforHBV．Methods：Withthemethodofdensitygradientcentrifugation，therandomlyselectedinfectionsweredividedintotwogroups(immunetoleranceandimmuneclearance)andthecontr01．IsolatingPBMCWiththemethodofdensitygradientcentrifugation，and

8、partlypurifyCD4+Tlymphocyte、CD8+Tlymphocyteanddendriticcellthroughimmunomagneicbeadteachenique(IBT)，detectingcellsurfacespecificmarkersofallthelymphocytewereanalyzedbyFCM．ThespecificThlcellreactionandactivityofCTLinimmunetolerantphasean